【含量测定】阿胶 照高效液相色谱-质谱法(通则0512和通则0431)测定。
色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(内径2.1mm);以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱,流速为每分钟0.3ml。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~25 | 5→20 | 95→80 |
25~40 | 20→50 | 80→50 |
采用三重四极杆质谱检测器,电喷雾正离子模式(ESI)正离子模式下,多反应监测(MRM),监测离子对见下表:
测定成分 | 定量离子对m/z | 定性离子对m/z |
驴源多肽A1 | 469.25(双电荷)→712.30 | 469.25(双电荷)→783.40 |
驴源多肽A2 | 618.35(双电荷)→779.40 | 618.35(双电荷)→850.40 |
理论塔板数按驴源多肽A1峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备 取驴源多肽A1对照品、驴源多肽A2对照品适量,精密称定,加1%碳酸氢铵溶液分别制成每1ml含2.5μg的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末约4片的量,置锥形瓶中,精密称定,加1%碳酸氢铵溶液50ml,超声处理30分钟(功率250W,频率40kHz),放冷,摇匀。精密量取1ml至5ml量瓶中,加胰蛋白酶溶液(取序列分析级胰蛋白酶,加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml中含1mg的溶液,临用前现配)1ml,加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度,摇匀,37℃恒温酶解12小时,取续滤液,即得。
测定法 精密量取对照品溶液1ml、2ml、5ml、10ml、20ml和25ml,分别置50ml量瓶中,加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度,制成标准曲线溶液。分别精密吸取不同浓度的标准曲线溶液与供试品溶液各5μl,注入高效液相色谱-质谱联用仪,以对照品峰面积为纵坐标,对照品浓度为横坐标制备标准曲线。从标准曲线读出供试品溶液中相当于驴源多肽A1和驴源多肽A2的量,计算即得。
本品每片含阿胶以驴源多肽A1(C41H68N12O13)和驴源多肽A2(C51H82N18O18)的总量计,应不得少于26.2μg。