【鉴别】阿胶 照高效液相色谱(通则0512)和质谱法(通则0431)测定。
色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(色谱柱内径2.1mm);以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱,流速为每分钟0.3ml;采用质谱检测器,电喷雾正离子模式(ESI+),多反应监测(MRM),选择质荷比m/z 539.8(双电荷)→612.4和m/z 539.8(双电荷)→923.8作为检测离子对。取对照药材溶液,进样5μl,按上述离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于10:1。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~25 | 5→20 | 95→80 |
25~40 | 20→50 | 80→50 |
对照药材溶液的制备 取阿胶对照药材0.1g,置50ml量瓶中,加1%碳酸氢铵溶液40ml,超声处理30分钟,再加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度,即得。
供试品溶液的制备 取本品适量,研细,取约4片的量(含阿胶约0.10g),加1%碳酸氢铵溶液50ml,超声处理30分钟,放冷,用微孔滤膜过滤,即得。
取上述对照药材溶液和供试品溶液各100μl,置微量进样瓶中,加胰蛋白酶溶液10μl(取序列分析级胰蛋白酶,加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml中含1mg的溶液,临用前现配),摇匀,37℃恒温酶解12小时,即得。
吸取上述酶解好的对照药材溶液和供试品溶液各5μl,注入高效液相色谱-质谱联用仪,测定。
以质荷比(m/z)539.8(双电荷)→612.4和m/z 539.8(双电荷)→923.8离子对提取的供试品离子流色谱中,应同时出现与对照药材溶液保留时间一致的色谱峰。