妇康片中马皮源成分检查方法

发布时间:2024-06-24


【检查】马皮源成分  照高效液相色谱(通则0512)和质谱法(通则0431)测定。

    色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(色谱柱内径2.1mm);以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱,流速为每分钟0.3ml;采用质谱检测器,电喷雾正离子模式(ESI+),多反应监测(MRM),选择m/z386.4(双电荷)→377.3和m/z 386.4(双电荷)→322.3为检测离子对。取马皮源成分参比溶液,进样5μl,按上述离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于10:1。

时间(分钟)

流动相A(%)

流动相B(%)

0~25

3→20

97→80

25~40

20→50

80→50

马皮源成分参比溶液的制备 取马源寡肽A对照品适量,精密称定,加1% 碳酸氢铵溶液制备成每1ml含马源寡肽A 0.2 µg的溶液。

供试品溶液的制备 取本品适量,研细,取约4片的量(含阿胶约0.10g),加1%碳酸氢铵溶液50ml,超声处理30分钟,放冷,用微孔滤膜过滤,即得。

取上述马皮源成分参比溶液和供试品溶液各100μl,置微量进样瓶中,加胰蛋白酶溶液10μl(取序列分析级胰蛋白酶,加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml中含1mg的溶液,临用前现配),摇匀,37恒温酶解12小时,即得。

    测定法  分别吸取酶解好的马皮源成分参比溶液与供试品溶液各5μl,注入高效液相色谱-质谱联用仪,测定,即得。

判定原则 (1)供试品的提取离子流色谱中,未同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰,视为未检出;(2)供试品的提取离子流色谱中,同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰,且供试品色谱中m/z386.4(双电荷)→377.3色谱峰面积不大于参比溶液中相应的峰面积值者,视为未检出;(3)供试品的提取离子流色谱中,同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰,且供试品色谱中m/z386.4(双电荷)→377.3色谱峰面积大于参比溶液中相应的峰面积值者,视为检出。

结果判定  供试品的提取离子流色谱中,应不得检出与参比溶液色谱相应的色谱峰。