四消丸中人造五灵脂的检验方法

发布时间:2024-06-24

照高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0512)测定。

色谱柱:岛津 C18-AQ HSS(2.1×150mm;1.9µm);流动相:以乙腈为流动相A,0.5%醋酸溶液为流动相B,按表5-5进行梯度洗脱;检测波长:350nm;流速:0.3ml/min;进样量:1µl、2µl;柱温:30℃。理论板数按杨梅苷峰计,应不低于5000,杨梅苷峰与相邻峰之间的分离度应符合要求。

表5-5 梯度洗脱表

时间(分钟)

流动相A(%)

流动相B(%)

0~10

75→74.5

25→25.5

10~11

74.5→90

25.5→10

11~15

90

10

 

对照品溶液(参比溶液):精密称取杨梅苷对照品11.00mg,置100ml量瓶中,加甲醇至刻线,摇匀,作为储备液。再精密量取杨梅苷对照品储备液1ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻线,摇匀,作为对照品溶液。再将杨梅苷对照品储备液逐级稀释,配制成14.1μg/ml 杨梅苷参比溶液。

供试品溶液:取本品适量,研细,取约1.5g(相当于醋五灵脂药材0.2g),精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入80%甲醇20ml,超声(500W,40kHz)1小时,放冷,滤过,作为供试品溶液。

对照药材溶液:取五灵脂对照药材0.2g,同供试品溶液制备方法制成五灵脂对照药材溶液。

本品中检出人造五灵脂以杨梅苷计不得过14.1μg/ml

液质联用法

色谱方法:岛津 C18-AQ HSS (2.1×150mm;1.9µm);流动相:以乙腈为流动相A,0.5%醋酸溶液为流动相B,按表5-7进行梯度洗脱;流速为0.3 ml/min;供试品对照进样量1µl;柱温:30℃。

表5-7 梯度洗脱表

时间(分钟)

流动相A(%)

流动相B(%)

0~5

25→30

75→70

3~6

30→90

70→10

质谱方法:采用质谱检测器,离子源:电喷雾离子源(electronic spray ionization,ESI),正离子扫描,多反应监测模式(MRM);利用保留时间和离子丰度判断定性结果,利用峰面积半定量;Curtain Gas:35.0;Collision Gas:中等;IonSpray Voltage:5500.0;Temperature:550,质谱参数见表5-8。

表5-8 质谱参数表

成分

相对分子质量

时间

min

母离子m/z

子离子m/z

碰撞能量

eV

模式

杨梅苷

464.386

3.8~3.9

319.0

195.0

125.0

108.0

26/15/15

+

参比溶液:取HPLC研究项下储备液,加基质溶液最终稀释成14.1μg/ml 杨梅苷对照品溶液(相当于四消丸中掺伪10%人造五灵脂样品溶液的面积均值)。

供试品溶液同HPLC项下供试品溶液

本品中检出人造五灵脂以杨梅苷计不得过14.1μg/ml