白眉蝮蛇毒兽药残留量测定方法

发布时间:2024-06-24

液相色谱串联质谱法

色谱条件及系统适用性    色谱柱为Waters Coetecs T3 (2.1×100 mm,2.7 μm),流动相A为0.1%甲酸-0.5 mmol/L乙酸铵水溶液,流动相B乙腈,柱温为40,流速为0.2 ml/min,进样量为5 μl,梯度洗脱,洗脱程序表1。

表1  梯度洗脱程序

时间(分钟)

流动相A(%)

流动相B(%)

流速(ml/min)

0

95

5

0.2

0.5

95

5

0.2

2

40

60

0.2

9

5

95

0.2

10

5

95

0.2

10.1

95

5

0.2

14

95

5

0.2

质谱条件:质谱检测器:ESI源( 正/负  电离模式);扫描方式:MRM多反应离子监测;离子化电压:5500/-4500V;脱溶剂气温度:550˚C;气帘气压力:35psi;辅助加热气压力55psi;雾化气压力:55psi。质谱条件见表2。

表2  大环内酯类、氯霉素、磺胺类和喹诺酮类药物定性定量离子对

化合物

母离子(m/Z)

定量子离子(m/Z)

碰撞能量(eV)

定性子离子(m/Z)

碰撞能量(eV)

DP电压(V)

氟苯尼考胺

247.7

230

18

130

34

80

土霉素

461

443

15

426

24

80

四环素

445

410

25

427

15

80

金霉素

479

444

27

462

21

80

多西环素

445

428

23

154

35

80

恩诺沙星

360.3

342.3

29

316.4

26

80

环丙沙星

332.2

314.3

25

288.3

22

80

沙拉沙星

386.3

342

23

367.8

23

80

诺氟沙星

320.3

302.3

25

276.3

20

80

氧氟沙星

362

318

22

261

34

80

培氟沙星

334.3

316

25

290

22

80

替米考星

869.5

696.5

55

174.2

55

80

林可霉素

407.2

126.1

34

359.2

25

80

磺胺甲基嘧啶

265.1

156

21

172

19

80

磺胺甲恶唑

254.1

108

32

156

20

80

磺胺二甲嘧啶

279.1

186.1

22

156.1

23

80

磺胺间二甲氧嘧啶

311

156

27

108

33

80

磺胺间甲氧嘧啶

281.1

156.1

22

108.1

33

80

磺胺喹恶啉

301.1

156

18

108

29

80

磺胺嘧啶

251.1

156

17

108

29

80

磺胺甲氧哒嗪

281.1

156

22

108

32

80

磺胺邻二甲氧嘧啶

311.1

156

22

92

37

80

磺胺氯哒嗪

285

156

17

108

32

80

磺胺噻唑

256

156

17

108

28

80

磺胺二甲异噁唑

268.1

156

17

113

17

80

磺胺甲噻二唑

271

156

17

108

29

80

甲氧苄啶

291.1

230

31

261

35

80

孔雀石绿

328.8

312.8

46

208

44

80

隐色孔雀石绿

330.8

316.2

26

239.3

42

80

甲硝唑

172.1

128

20

82

31

80

地美硝唑

142

96

21

81

34

80

氯霉素

320.9

151.9

-21

256.9

-16

-80

甲砜霉素

353.9

289.9

-18

184.9

-28

-80

氟甲砜霉素

356

336

-15

184.9

-27

-80

氟虫腈

435

330

-18

250

-33

-80

氟甲腈

387

351

-15

282

-42

-80

氟虫腈砜

451

282

-35

244

-60

-80

氟虫腈亚砜

419

383

-16

262

-36

-80

 

对照品溶液的制备    分别准确量取混合标准中间液1:0.25mL;混合标准中间液2:1.25mL;混合标准中间液3:2.5mL;混合标准中间液4:2.5mL;置于同一50mL容量瓶中,用甲醇稀释并定容至刻度,得到混合标准工作液。其中土霉素、四环素、金霉素、多西环素、甲氧苄啶、氟苯尼考胺的浓度均为0.5μg/mL;氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜的浓度均为250ng/mL;恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星、替米考星、林可霉素、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺噻唑、磺胺二甲异噁唑、磺胺甲噻二唑、地美硝唑的浓度均为50ng/mL;磺胺甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉、磺胺嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、孔雀石绿、隐色孔雀石绿、甲硝唑的浓度均为25ng/mL;氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素的浓度均为5.0ng/mL。

供试品溶液的制备    蛇毒类样品的制备:精密称取白眉蛇毒50mg,加入高纯水1ml溶解,再加入1ml(1%甲酸乙腈)提取,超声30min,加入0.2g氯化钠,10000rpm离心5min,取上层液体备用。

注射用白眉蛇毒血凝酶样品的制备:取注射用白眉蛇毒血凝酶一支,加入高纯水1ml溶解,再加入1ml(1%甲酸乙腈)提取,超声30min,加入0.2g氯化钠,10000rpm离心5min,取上层液体备用。

测定法    精密量取空白、系列混合对照品溶液及供试品溶液各5 μl进样分析,以系列混合对照品溶液的浓度(ng/ml)为横坐标,以其对应的峰面积为纵坐标,进行线性回归,线性方程的相关系数(r)应大于0.99。供试品中不得检出大环内酯类、氯霉素、磺胺类和喹诺酮类药物。

定量限  土霉素、四环素、金霉素、多西环素、甲氧苄啶、氟苯尼考胺为200ng/g;氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜的浓度均为100ng/g;恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、替米考星、林可霉素、地美硝唑均为20ng/g;磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺噻唑、磺胺二甲异噁唑、磺胺甲噻二唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉、磺胺嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、孔雀石绿、隐色孔雀石绿、甲硝唑均为10ng/g;氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素均为2ng/g。