【检查】 马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ 照高效液相色谱-质谱法(中国药典2020年版四部通则0512和通则0431)测定。
色谱、质谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(色谱柱内径2.1 mm);以乙腈为流动相A,以5mmol/L甲酸铵(含0.1%甲酸)溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;柱温为30℃;流速为每分钟0.3ml。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~8 | 20→80 | 80→20 |
8~12 | 80 | 20 |
12~13 | 80→20 | 20→80 |
13~15 | 20 | 80 |
采用三重四级杆质谱检测器,电喷雾离子化(ESI)正离子模式下多反应监测(MRM),监测离子对见下表:
待测成分 | 定量离子对(m/z) | 定性离子对(m/z) |
马兜铃酸 Ⅰ | 359.0→298.0 | 359.0→296.0 |
马兜铃酸 Ⅱ | 329.0→268.0 | 329.0→294.0 |
对照品溶液的制备 取马兜铃酸Ⅰ对照品、马兜铃酸Ⅱ对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 ml中各含2μg的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备 取本品适量,除去包衣,研细,取约0.8 g,精密称定,精密加入70%甲醇50 ml,称定重量,超声处理(功率500 W,频率40 kHz)45分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别吸取对照品溶液和供试品溶液各1μl注入液相色谱-质谱联用仪,测定,记录色谱图。
结果判定 供试品色谱中应不得检出与对照品色谱中马兜铃酸Ⅰ色谱峰及马兜铃酸Ⅱ色谱峰相一致的色谱峰(方法检出限为2pg)。