2.1别嘌醇片、别嘌醇缓释片有关物质 HPLC 测定方法
【有关物质】 照高效液相色谱法(通则0512)测定。
稀释剂：0.125%磷酸二氢钾溶液：甲醇=90:10
供试品溶液取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于别嘌醇50mg),置100ml 量瓶中，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液5ml, 超 声 1min 使溶解，立即用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过。
对照品贮备液分别精密称取别嘌醇对照品5mg 、别嘌醇杂质A 、B 、C 、D 、E各 5mg,置10ml 量瓶中加0.1mol/L的氢氧化钠溶液0.5ml, 超 声 1min 溶解，用稀释剂定容，摇匀；分 别精密移取别嘌醇对照品溶液1ml、别嘌醇杂质A 、B 、C对照品溶液各2ml, 别嘌醇杂质 D、E对照品溶液各1ml, 置10ml 量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
系统适用性溶液精密移取别嘌醇对照品贮备溶液、别嘌醇杂质A 、B 、C 、D 、E 对照品贮备液各1ml,至同一100ml 量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
混合对照品溶液精密移取别嘌醇杂质A、B、C、D、E对照品贮备液各1ml, 至同一100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
对照溶液精密量取供试品溶液1ml,置10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，再精密移取1ml置100ml 量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.125%磷酸二氢钾为A 相，甲醇为B 相，按下表进行线性梯度洗脱；检测波长为220nm;流速为0.5ml/min;柱温为35℃;进样体积20μl:
别嘌醇片及缓释片有关物质色谱条件梯度洗脱表
时间(min) | A | B |
0 | 85 | 15 |
15 | 75 | 25 |
25 | 55 | 45 |
35 | 50 | 50 |
45 | 85 | 15 |
55 | 85 | 15 |
系统适用性要求系统适用性溶液中各杂质之间分离度符合要求，理论塔板数按别嘌醇峰计不低于5000。
测定法精密量取供试品溶液、系统适用性溶液、对照品溶液、对照溶液各20μl, 分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
限度：供试品溶液色谱图中如有与混合对照品中各杂质保留时间一致的色谱峰，按外标 法以峰面积计算，杂质A 不得过标示量的0.2%,杂质B 不得过标示量的0.1%,杂质C 不得过 标示量的0.1%,杂质D不得过标示量的0.1%,杂质E不得过标示量的0.1%,其他单个杂质不 得大于对照溶液主峰面积(0.1%),其他各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积的3倍(0.3%)。
2.2 别嘌醇缓释胶囊有关物质检测方法
【有关物质】照高效液相色谱法(通则0512)测定。
稀释剂：0.125%磷酸二氢钾溶液：甲醇=90:10
供试品溶液取装量差异项下内容物，研细，精密称取适量(约相当于别嘌醇50mg), 置 100ml 量瓶中，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液5ml, 超声1min 使溶解，立即用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
对照品贮备液分别精密称取别嘌醇对照品5mg、别嘌醇杂质A 、B 、C 、D 、E各 5mg, 置10ml 量瓶中加0.1mol/L的氢氧化钠溶液0.5ml, 超声1min 溶解，用稀释剂定容，摇匀；分别 精密移取别嘌醇对照品溶液1ml、别嘌醇杂质A 、B 、C对照品溶液各2ml,别嘌醇杂质D 、E对照品溶液各1ml, 置10ml 量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
系统适用性溶液精密移取别嘌醇对照品贮备溶液、别嘌醇杂质A、B、C、D、E 对照品贮备液各1ml,至同一100ml 量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
混合对照品溶液：精密移取别嘌醇杂质A 、B 、C 、D 、E对照品贮备液各1ml, 至同一100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
混合对照品溶液精密量取别嘌醇杂质A、B、C、D、E对照品贮备液各1ml, 至同一100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
对照溶液精密量取供试品溶液1ml, 置10ml 量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，再精密量取1ml置100ml 量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.125%磷酸二氢钾为A 相，甲醇为B 相，按下表进行线性梯度洗脱；检测波长为220nm;流速为0.5ml/min;柱温为35℃;进样体积20μl。
别嘌醇缓释胶囊有关物质色谱条件梯度洗脱表
时间(min) | A | B |
0 | 85 | 15 |
15 | 75 | 25 |
25 | 55 | 45 |
35 | 50 | 50 |
45 | 85 | 15 |
55 | 85 | 15 |
系统适用性系统适用性溶液中各杂质之间分离度应符合要求，理论塔板数按别嘌醇峰计不低于5000。
测定法精密量取供试品溶液系统适用性溶液、混合对照品溶液、对照溶液各20μl,注入液相色谱仪，记录色谱图。
限度：供试品溶液色谱图中如有与混合对照品中各杂质保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰 面积计算，杂质A不得过标示量的0.2%,杂质B不得过标示量的0.1%,杂质C 不得过标示量的0.1%, 杂质D 不得过标示量的0.1%,杂质E不得过标示量的0.1%,其他单个杂质不得大于对照溶液主峰面积(0.1%),其他各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积的3倍(0.3%)。
