【指纹图谱】 照高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters Acquity UPLC Hss T3 150×2.1mm,1.8µm);流动相A:甲醇,流动相B:0.1%磷酸溶液,按下表中的规定进行梯度洗脱;流速为0.3ml/min;柱温30℃;检测波长为276nm。理论板数以黄芩苷峰计算应不低于5000。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~5 | 3→20 | 97→80 |
5~20 | 20→40 | 80→60 |
20~27 | 40→45 | 60→55 |
27~40 | 45→58 | 55→42 |
40~50 | 58→90 | 42→10 |
50~53 | 90 | 10 |
53~54 | 90→3 | 10→97 |
54~64 | 3 | 97 |
参照物溶液的制备 取黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含黄芩苷40μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备 取三黄片10片,除去包衣,精密称定,研细,取约0.1g,置锥形瓶中,精密加入70%甲醇25ml,称定重量,超声提取30分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1μl,注入液相色谱仪,测定,即得,记录64分钟色谱图,即得。
供试品指纹图谱中,应呈现与参照物色谱法保留时间相应的色谱峰。按中药指纹图谱相似度评价系统计算0~64分钟的色谱峰,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90。
对照指纹图谱
峰5-黄芩苷(S)