注射用重组人II型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白、依那西普注射液的纯度测定方法(疏水色谱法)

发布时间:2024-06-20

参照高效液相色谱法(通则0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验以疏水的聚甲基丙烯酸酯为填充剂的色谱柱(如4.6mm×50mm,粒度2.5μm或其他适宜的色谱柱),以1.8mol/L硫酸铵、0.1mol/L磷酸氢二钠缓冲液(pH 7.0)为流动相A,以0.1mol/L磷酸氢二钠缓冲液(pH 7.0)为流动性B,流速为每分钟0.6ml,荧光检测器:激发波长278nm,发射波长350nm,梯度洗脱见下表。

时间(分钟)

流动相A(%)

流动相B(%)

0

100

0

18.5

44

56

19.5

44

56

21

40

60

22

40

60

30

0

100

31

100

0

35

100

0

供试品溶液的制备取本品1支,加1ml灭菌注射用水复溶,取上述溶液适量,用水稀释至约为2mg/ml的供试品溶液(注射用无菌粉末)。

取本品适量,用水稀释至约为2mg/ml的供试品溶液(注射液)。

测定法精密吸取供试品溶液5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

按面积归一化法计算,主峰应≥70.0%,峰1应≤4.0%,峰3应≤28.0%。