方法 照高效液相色谱法(中国药典2020年版通则0512)和质谱法(中国药典2020年版通则0413)测定。
色谱、质谱条件与系统适用性实验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(2.7μm,2.1×100mm);以甲醇为流动相A,含0.01 mol/L甲酸铵的0.1%甲酸为流动相B,梯度洗脱(0~2 min,15% A;2~10 min,15% A→47% A;10~15 min,47% A→98% A;15~18 min,98% A);流速:每分钟0.3mL;采用质谱检测器,电喷雾离子源(ESI),正负离子扫描,多反应监测模式(MRM),各对照品的质谱参数见表7。取对照品溶液,进样1µl,按表1中离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于10:1。
表1 金青感冒颗粒中各对照品保留时间和主要质谱参数
化合物 | tR (min) | MS1 m/z | MS2 m/z | DP (V) | CE (eV) |
大豆苷元 | 10.96 | 255.1 | 199.2 | 148 | 35 |
10.96 | 255.1 | 181.1 | 148 | 43 | |
染料木素 | 12.22 | 271.1 | 153.1 | 159 | 35 |
12.22 | 271.1 | 215.2 | 159 | 35 | |
橘皮素 | 14.69 | 373.2 | 358.1 | 196 | 31 |
14.69 | 373.2 | 343.1 | 196 | 30 | |
(R,S)-告依春 | 1.47 | 130 | 70.2 | 60 | 19 |
1.47 | 130 | 96.2 | 60 | 13 | |
靛玉红 | 14.76 | 261.1 | 157.1 | -111 | -42 |
14.76 | 261.1 | 217.1 | -111 | -34 | |
新绿原酸 | 1.4 | 353.1 | 191.1 | -63 | -22 |
1.4 | 353.1 | 179 | -63 | -28 | |
绿原酸 | 2.48 | 353.1 | 191.1 | -73 | -24 |
2.48 | 353.1 | 179 | -73 | -24 | |
隐绿原酸 | 2.81 | 353.1 | 191.2 | -78 | -34 |
2.81 | 353.1 | 179.1 | -78 | -23 | |
迷迭香酸 | 9.15 | 359.1 | 161.2 | -76 | -21 |
9.15 | 359.1 | 197 | -76 | -25 | |
大豆苷 | 5.86 | 415.1 | 252.1 | -172 | -37 |
5.86 | 415.1 | 223.1 | -172 | -61 | |
甘草苷 | 7.05 | 417.1 | 254.9 | -152 | -31 |
7.05 | 417.1 | 134.9 | -152 | -36 | |
染料木苷 | 7.51 | 431.1 | 269 | -135 | -31 |
7.51 | 431.1 | 238.9 | -135 | -62 | |
牡荆素 | 7.62 | 431.1 | 311.1 | -128 | -32 |
7.62 | 431.1 | 283.1 | -128 | -43 | |
荭草苷 | 6.84 | 447.2 | 327.1 | -124 | -33 |
6.84 | 447.2 | 357.2 | -124 | -30 | |
异荭草苷 | 7.2 | 447.2 | 357.2 | -150 | -33 |
7.2 | 447.2 | 327.1 | -150 | -32 | |
槲皮苷 | 10.04 | 447.2 | 300.1 | -139 | -39 |
10.04 | 447.2 | 271.2 | -139 | -61 | |
异槲皮苷 | 8.86 | 463.1 | 300 | -110 | -32 |
8.86 | 463.1 | 271.1 | -110 | -62 | |
金丝桃苷 | 8.69 | 463.2 | 300.1 | -146 | -42 |
8.69 | 463.2 | 254.9 | -146 | -55 | |
柚皮芸香苷 | 8.24 | 579.2 | 271.1 | -189 | -33 |
8.24 | 579.2 | 151 | -189 | -57 | |
甘草酸铵 | 14.52 | 821.5 | 351.2 | -161 | -58 |
14.52 | 821.5 | 645.5 | -161 | -62 | |
芦丁 | 8.9 | 609.1 | 300 | -156 | -51 |
8.9 | 609.1 | 271.2 | -156 | -73 | |
橙皮苷 | 9.01 | 609.2 | 301.2 | -127 | -36 |
9.01 | 609.2 | 325.2 | -127 | -41 |
对照品溶液的制备 精密称取上述对照品各10mg,分别置100ml量瓶中,加70%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成各成分质量浓度分别为100µg/ml的贮备液。
精密量取牡荆素、槲皮苷、芦丁、大豆苷元、橘皮素、(R,S)-告依春贮备液各1ml,置10ml量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀。精密量取上述溶液及靛玉红、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、迷迭香酸、大豆苷、甘草苷、染料木苷、荭草苷、异荭草苷、异槲皮苷、金丝桃苷、柚皮芸香苷、甘草酸铵、橙皮苷、染料木素贮备液各1ml,置100ml量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,作为混合对照品溶液(st1000)。
分别精密量取混合对照品溶液各8、6、4、2、1ml,分别置10ml量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,作为系列混合对照品溶液。(分别记为st800、st600、st400、st200、st100)。
供试品溶液的制备 精密称取本品约1袋的量,精密加入70%甲醇50ml,称定重量,超声提取30分钟,放冷,加70%甲醇补足重量,滤过,滤液作为供试品溶液。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 1µl,注入液相色谱-质谱联用色谱仪,测定,即得。