【含量测定】 制草乌、制川乌 照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件及系统适用性 色谱条件及系统适用性 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈为流动相A,0.2%冰醋酸溶液(以三乙胺调整pH至6.20)为流动相B,梯度洗脱;检测波长为235nm。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~44 | 21→31 | 79→69 |
65 | 35 | 65 |
70 | 35 | 65 |
供试品溶液的制备 取装量差异/重量差异项下本品,研细,取约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入0.1mol/L盐酸溶液25ml,密塞,称定重量,超声处理(功率400W,频率40kHz)40分钟,放冷,再称定重量,用0.1mol/L盐酸溶液补足减失的重量,摇匀,离心。精密量取上清液10ml,加在固相萃取柱(以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂,150mg或200mg,6ml,依次用乙腈、水各6ml预洗)上,依次以水3ml、氨溶液(5→100)10ml,水、甲醇、乙腈各5ml洗脱,待洗脱液流尽后,放置5分钟,继用乙腈-浓氨试液(90∶10)的混合溶液15ml洗脱,收集洗脱液,于40℃以下减压回收溶剂至干,精密加入流动相(A∶B=21∶79)3ml使溶解,滤过,即得。
对照品溶液的制备 取苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰次乌头原碱对照品、苯甲酰新乌头原碱对照品适量,精密称定,加流动相(A∶B=21∶79)制成每1ml含苯甲酰乌头原碱20μg、苯甲酰次乌头原碱50μg、苯甲酰新乌头原碱0.1mg、的混合溶液,即得。
测定法 分别精密量取供试品溶液、对照品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品每克含制川乌和制草乌以苯甲酰乌头原碱(C32H45NO10)、苯甲酰次乌头原碱(C31H43NO9)和苯甲酰新乌头原碱(C31H43NO10)的总量计,应为0.22~0.55mg。