桔梗 照高效液相色谱法测定(通则0512)。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,YMC-Pack ODS-A色谱柱(柱长为25cm,内径为4.6mm,粒径为5μm);以乙腈为流动相A,水为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;流速:1.0ml/min;柱温:35℃;蒸发光散射检测器检测。
表1 流动相梯度
时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~25 | 27 | 73 |
25~26 | 27→90 | 73→10 |
26~31 | 90 | 10 |
31~32 | 90→27 | 10→73 |
32~40 | 27 | 73 |
对照品溶液的制备 取桔梗皂苷D对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备 精密量取本品10ml,置50ml离心管中,加水10ml,摇匀,用水饱和的正丁醇振摇提取3次(必要时离心),每次20ml,合并正丁醇液,用氨试液50ml洗涤,弃去氨液,再用正丁醇饱和水50ml洗涤,弃去水液,正丁醇回收溶剂至干,残渣加甲醇适量使溶解,转移至5ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液5μL、10μL,供试品溶液20μL,注入液相色谱仪,测定,以外标两点法对数方程计算,即得。
本品每1ml含桔梗以桔梗皂苷D(C57H92O28)计,不得少于6μg。