照高效液相色谱(中国药典2020年版通则0512)和质谱法(中国药典2020年版通则0431)测定。
色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(色谱柱内径2.1mm);以乙腈为流动相A,0.1%甲酸溶液为流动相B,按表1中的规定进行梯度洗脱;流速为0.35ml/min;柱温:40℃;采用质谱检测器,电喷雾正离子模式(ESI+),进行多反应监测(MRM),选择质荷比m/z945.40→439.15作为定量离子对。
表1 梯度洗脱程序
时间 | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~5.0 | 25→40 | 75→60 |
5.0~7.0 | 40 | 60 |
7.0~7.1 | 40→25 | 60→75 |
7.1~13.0 | 25 | 75 |
对照品溶液的制备 取柴胡皂苷k对照品适量,加50%甲醇制成每1ml含0.2438mg的溶液作为母液,以母液配制系列校准溶液。
供试品溶液的制备 取血府逐瘀丸(大蜜丸,其他丸剂,颗粒,片剂,软胶囊)粉碎(软胶囊取内容物),取约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入2%氨水的50%甲醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷至室温,再称定重量,用2%氨水的50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3ul,注入高效液相色谱-质谱联用仪,测定,记录色谱图,用外标法计算,即得。
判定原则 以制剂中每1g柴胡含柴胡皂苷K不得过0.13mg作为检出限。