【指纹图谱】 照高效液相色谱法(2020年版中国药典通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以YMC C18(5μm,4.6mm×250mm)为色谱柱;以甲醇为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,按表n中的规定进行梯度洗脱;检测波长254nm;柱温为30℃;流速为每分钟1.0ml。理论板数按芍药苷峰计算应不得低于3000。
表. 流动相梯度洗脱程序
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~7 | 7 | 93 |
7~12 | 7→17 | 93→83 |
12~40 | 17→35 | 83→65 |
40~65 | 35→70 | 65→30 |
65~75 | 70 | 30 |
75~75.5 | 70→7 | 30→93 |
75.5~85 | 7 | 93 |
参照物溶液的制备取氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、肉桂酸、甘草酸对照品适量,加甲醇制成每1mL分别含0.1mg的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备精密量取本品1ml,置10ml量瓶中,加入90%甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,测定,即得。
供试品指纹图谱中应分别呈现与参照物色谱峰保留时间相同的色谱峰,并应呈现12个共有峰,按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度应不得低于0.90。
小建中合剂对照指纹图谱
(12个共有峰,其中峰4:氧化芍药苷;峰5:芍药内酯苷;峰6:芍药苷;峰8:苯甲酸;峰11:肉桂酸;峰12:甘草酸)