专属性多肽PA1 照高效液相色谱法(中国药典2020年版通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调pH值至2.5)为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为210nm;柱温为40℃;流速为每分钟1.0ml。理论板数按专属性多肽峰计算应不低于2500。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~5 | 10→29 | 90→71 |
5~45 | 29→31 | 71→69 |
对照品溶液的制备 取专属性多肽PA1对照品适量,精密称定,加75%甲醇制成每1ml含专属性多肽PA1 15μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备 精密量取本品40ml,通过已活化的C18小柱(Waters Sep-Pak® Vac 6cc C18-1g),用50%甲醇含0.1%甲酸溶液20ml洗涤,弃去;再用75%甲醇含0.1%甲酸溶液35ml洗脱,收集洗脱液,减压回收(75℃)至近干,用75%甲醇分次转移至5ml量瓶中,稀释至刻度,摇匀、离心,取上清液即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各50μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品每1ml含专属性多肽PA1的含量应不得少于0.14µg。