【指纹图谱】 照高效液相色谱法(中国药典2020年版通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(推荐使用Waters XSelect® HSS T3 C18,250mm×4.6mm,5μm);以甲醇为流动相A,0.1%磷酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;流速为每分钟0.6ml;柱温为25℃;检测波长为254nm。理论板数按肌苷峰计算应不低于5000。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~20 | 0 | 100 |
20~30 | 0→12 | 100→88 |
30~45 | 12 | 88 |
45~60 | 12→27 | 88→73 |
参照物溶液的制备 分别取尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、鸟苷、肌苷和原儿茶酸对照品适量,加水制成每1ml各含5μg的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备 精密量取本品2ml,置10ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,记录60分钟的色谱图,即得。
供试品指纹图谱中应分别呈现与参照物色谱峰保留时间相对应的色谱峰。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度应不得低于0.85。
对照指纹图谱
10个共有峰 峰1:尿嘧啶 峰2:次黄嘌呤 峰5:黄嘌呤
峰6:尿苷 峰7:鸟苷 峰8:肌苷 峰10:原儿茶酸