【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2020年版通则0512)测定。
供试品溶液 取本品20片,精密称定,研细,精密称取细粉适量(约相当于硫酸软骨素钠20mg),置100ml量瓶中,加0.1%磷酸溶液适量,超声约30分钟使硫酸软骨素钠、维生素B1、维生素B6溶解,用0.1%磷酸溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液。
对照品溶液 取硫酸软骨素钠、维生素B1和维生素B6对照品各适量,精密称定,加0.1%磷酸溶液使溶解并定量稀释制成每1ml中约含硫酸软骨素钠200μg、维生素B110μg与维生素B65μg的溶液。
色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.02mol/L庚烷磺酸钠溶液(用稀磷酸调节pH值至3.2)为流动相A,乙腈为流动相B,按下表进行梯度洗脱;流速为每分钟0.8ml;检测波长为194nm、291nm与246nm;进样体积为20μl;柱温为35℃。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 90 | 10 |
15 | 70 | 30 |
20 | 70 | 30 |
20.1 | 90 | 10 |
31 | 90 | 10 |
测定法 精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,硫酸软骨素钠、维生素B1与维生素B6的检测波长分别为194nm、246nm与291nm,按外标法以峰面积计算。