【特征图谱】 照高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0512)测定。
色谱条件与系统适应性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(250×4.6mm,4µm);以乙腈为流动相A,0.1%甲酸溶液为流动相B,按表中的规定进行梯度洗脱;流速为每分钟1ml;柱温30℃;检测器为蒸发光散射检测器检测。理论板数按黄芪皂苷Ⅱ色谱峰计不得低于3000。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~10 | 10→15 | 90→85 |
10~20 | 15→14 | 85→86 |
20~25 | 14→19 | 86→81 |
25~33 | 19→27 | 81→73 |
33~40 | 27 | 73 |
40~65 | 27→42 | 73→58 |
65~70 | 42→43 | 58→57 |
70~80 | 43→60 | 57→40 |
参照物溶液的制备 取人参皂苷Rf对照品、黄芪皂苷Ⅱ对照品、五味子醇甲对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml各含20µg、40µg、40µg的参照物溶液。
供试品溶液的制备 精密量取本品10ml,加在D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm,柱高为27cm)上,用水200ml洗脱,弃去洗脱液,继用乙醇100ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10µ1,注入液相色谱仪,测定,即得。
供试品色谱中应呈现20个特征峰,与黄芪皂苷Ⅱ相对应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定的±8%之内。规定值为0.51(峰1)、0.63(峰2)、0.63(峰3)、0.68(峰4)、0.69(峰5)、0.73(峰6)、0.80(峰7)、0.86(峰8)、0.89(峰9)、0.90(峰10)、0.94(峰11)、0.95(峰12)、1.00(峰13)、1.04(峰14)、1.08(峰15)、1.16(峰16)、1.17(峰17)、1.19(峰18)、1.34(峰19)、1.35(峰20)。
图66 强身口服液对照特征图谱
20个共有峰中 峰1:毛蕊异黄酮葡萄糖苷 峰2:人参皂苷Rg1 峰3:人参皂苷Re、峰8:人参皂苷Rf 峰9:人参皂苷Rb1 峰10:黄芪甲苷 峰11:人参皂苷Rb3 峰12:人参皂苷Ro 峰13:黄芪皂苷Ⅱ 峰16:黄芪皂苷Ⅰ 峰17:五味子醇甲 峰20:人参三醇