【检查】 龙血素B照高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B;流速为每分钟1.0ml;柱温为30℃;检测波长为274nm。取龙血素A对照品和龙血素B对照品适量,加甲醇制成每1ml各含50μg的混合溶液,进样10μl,分离度应大于1.5。理论板数按龙血素B峰计算应不低于6000。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0〜35 | 40 | 60 |
35〜40 | 40→90 | 60→10 |
40〜45 | 90 | 10 |
参照溶液的制备取龙血素B对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含4μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备取本品4粒的内容物,置具塞锥形瓶中,精密加入75%乙醇20ml,称定重量,超声处理(功率200W,频率40kHz)30分钟,放冷,用75%乙醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
结果判断供试品色谱中,应不得出现与龙血素B对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰,则采用二极管阵列检测器比较相应的色谱峰的紫外-可见吸收光谱,在200~400nm应不相同;若吸收光谱相同,该色谱峰的峰面积应不大于龙血素B参照溶液色谱峰的峰面积。
备注:必要时可采用高效液相色谱-质谱联用的方法验证。建议采用乙腈-0.1%甲酸流动相系统,电喷雾正离子模式(ESI+),进行多反应监测(MRM),选择m/z 287.1→151.1和287.1→121.0作为龙血素A的检测离子对,m/z 317.2→181.0和317.2→121.0作为龙血素B的检测离子对。