【检查】照高效液相色谱法（中国药典2020年版通则0512）和质谱法（中国药典2020年版通则0431）测定。
色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（100mm×2.1mm×1.9μm）；以乙腈为流动相A，0.1％甲酸为流动相B，梯度洗脱（0～3分钟，A相25～30％；3～30分钟，A相30～50％；30～31分钟，A相50～90％；31～34分钟，A相90％；34～35分钟，A相90～25％；35～40分钟，A相25％）；流速：0.3ml/min；柱温：35℃；进样量：1μl。采用电喷雾离子源，负离子扫描，多反应监测（MRM）模式；质谱扫描参数见下表。
表 质谱扫描参数
化合物 | 母离子（m/z） | 子离子（m/z） |
尼泊尔柴胡皂苷k | 943.5 | 797.5 |
943.5 | 635.4* | |
943.5 | 781.5 |
*为定量离子对
对照品溶液的制备 取尼泊尔柴胡皂苷k对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含270ng的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品水蜜丸适量，研碎，取约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入含5%浓氨试液的甲醇溶液20ml，密塞，称定重量，超声处理（功率500W，频率37kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用5%浓氨试液的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，即得。
结果判定 供试品的m/z 943.5→797.5、m/z 943.5→635.4和m/z 943.5→781.5提取离子流色谱图中，若同时出现与对照品色谱保留时间相同的色谱峰，则要求样品中m/z 943.5→635.4提取离子流图中色谱峰面积不得超过对照品m/z 943.5→635.4提取离子流图中的色谱峰面积。
