【鉴别】蝉蜕特征多肽 照高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0512)和质谱法(中国药典2020年版四部通则0431)测定。
色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长100mm,内径2.1mm,粒径为1.7μm);以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;流速为每分钟0.3ml;采用质谱检测器,多反应检测(MRM), 电喷雾正离子(ESI+)模式,选择质荷比(m/z)530.8(双电荷)→632.3和m/z530.8(双电荷)→761.4作为检测离子对。取蝉蜕药材溶液,进样5µl,按上述离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于3:1。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~12 | 10 | 90 |
12~13 | 10→80 | 90→20 |
13~16 | 80 | 20 |
参比溶液的制备 取蝉蜕药材粉碎,取0.5g,加水50ml煎煮60分钟,减压浓缩至近干,加1%碳酸氢铵溶液25ml,超声处理60分钟,放冷,自“用微孔滤膜滤过”起,同法制成对照药材溶液。
供试品溶液的制备 取咽炎片20片,除去糖衣或薄膜衣,研细,取5g置具塞锥形瓶中,加入1%碳酸氢铵溶液15ml,超声处理60分钟,取出,放冷,离心(每分钟8000转)5分钟,用微孔滤膜滤过,取续滤液100μl,置微量进样瓶中,加胰蛋白酶溶液(取序列分析级胰蛋白酶,加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml中含2mg的溶液临用前现配)10μl,摇匀,37℃恒温酶解12小时,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5µl,注入高效液相色谱-质谱联用仪,测定,即得。
结果判断 以(m/z)530.8(双电荷)→632.3和m/z530.8(双电荷)→761.4提取的供试品离子流色谱中,应同时出现与对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。