芦丁片有关物质检查方法

发布时间:2022-12-28

有关物质  照高效液相色谱法(中国药典 2020年版四部通则0512)测定。

溶剂  流动相A-甲醇(80:20)。

供试品溶液  取本品细粉适量(约相当于芦丁20mg),置50ml量瓶中,加甲醇40ml超声使溶解,用流动相A稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。

对照品溶液  取芦丁对照品适量,用甲醇溶解并定量稀释制成每lml中含0.08mg的溶液,精密量取适量,用溶剂稀释制成每lml中含8μg的溶液。

灵敏度溶液  精密量取对照品溶液适量,用溶剂稀释制成每lml中含0.2μg的溶液。

杂质对照品贮备溶液  取异槲皮苷、山柰酚- 3-O-芸香糖苷、水仙苷及槲皮素对照品各适量,置同一量瓶中,用甲醇溶解并定量稀释制成每lml中各含0.2mg的溶液,作为杂质对照品贮备溶液。

系统适用性溶液  取芦丁对照品约10mg,精密称定,置25ml量瓶中,加甲醇20ml超声使溶解,精密加入杂质对照品贮备溶液1ml,用流动相A稀释至刻度,摇匀。

色谱条件  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(ACE Excel C18,4.6mm×250mm,5μm或效能相当的色谱柱);以0.125%磷酸溶液为流动相A,以乙腈为流动相B,先以流动相A-流动相B(82:18)等度洗脱,待芦丁峰洗脱完毕后立即按下表进行线性梯度洗脱;柱温40;流速每分钟1.0ml;检测波长为254nm;进样体积10μl。

时间(分钟)

流动相A(%)

流动相B(%)

0

82

18

20

60

40

30

60

40

31

82

18

41

82

18

 

系统适用性要求  系统适用性溶液色谱图中出峰顺序为芦丁、异槲皮苷、山柰酚- 3-O-芸香糖苷、水仙苷、槲皮素,山柰酚- 3-O-芸香糖苷峰与水仙苷峰分离度应符合规定。灵敏度溶液色谱图中,主成分峰高的信噪比应不小于10。

测定法  精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。

限度  供试品溶液色谱图中如有杂质峰,按加校正因子的主成分外标法计算,均应符合下表中的限度要求。小于灵敏度溶液主峰面积的杂质峰忽略不计。

名称

校正因子

限度(%)

异槲皮苷

0.71

2.0

山柰酚- 3-O-芸香糖苷

1.34

2.0

水仙苷

1.0

3.0

槲皮素

0.49

2.0

其他单个杂质

1.0

1.0

各杂质总和

6.0