有关物质 照高效液相色谱法(中国药典 2020年版四部通则0512)测定。
溶剂 流动相A-甲醇(80:20)。
供试品溶液 取本品细粉适量(约相当于芦丁20mg),置50ml量瓶中,加甲醇40ml超声使溶解,用流动相A稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。
对照品溶液 取芦丁对照品适量,用甲醇溶解并定量稀释制成每lml中含0.08mg的溶液,精密量取适量,用溶剂稀释制成每lml中含8μg的溶液。
灵敏度溶液 精密量取对照品溶液适量,用溶剂稀释制成每lml中含0.2μg的溶液。
杂质对照品贮备溶液 取异槲皮苷、山柰酚- 3-O-芸香糖苷、水仙苷及槲皮素对照品各适量,置同一量瓶中,用甲醇溶解并定量稀释制成每lml中各含0.2mg的溶液,作为杂质对照品贮备溶液。
系统适用性溶液 取芦丁对照品约10mg,精密称定,置25ml量瓶中,加甲醇20ml超声使溶解,精密加入杂质对照品贮备溶液1ml,用流动相A稀释至刻度,摇匀。
色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(ACE Excel C18,4.6mm×250mm,5μm或效能相当的色谱柱);以0.125%磷酸溶液为流动相A,以乙腈为流动相B,先以流动相A-流动相B(82:18)等度洗脱,待芦丁峰洗脱完毕后立即按下表进行线性梯度洗脱;柱温40℃;流速每分钟1.0ml;检测波长为254nm;进样体积10μl。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 82 | 18 |
20 | 60 | 40 |
30 | 60 | 40 |
31 | 82 | 18 |
41 | 82 | 18 |
系统适用性要求 系统适用性溶液色谱图中出峰顺序为芦丁、异槲皮苷、山柰酚- 3-O-芸香糖苷、水仙苷、槲皮素,山柰酚- 3-O-芸香糖苷峰与水仙苷峰分离度应符合规定。灵敏度溶液色谱图中,主成分峰高的信噪比应不小于10。
测定法 精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。
限度 供试品溶液色谱图中如有杂质峰,按加校正因子的主成分外标法计算,均应符合下表中的限度要求。小于灵敏度溶液主峰面积的杂质峰忽略不计。
名称 | 校正因子 | 限度(%) |
异槲皮苷 | 0.71 | 2.0 |
山柰酚- 3-O-芸香糖苷 | 1.34 | 2.0 |
水仙苷 | 1.0 | 3.0 |
槲皮素 | 0.49 | 2.0 |
其他单个杂质 | 1.0 | 1.0 |
各杂质总和 | — | 6.0 |