【指纹图谱】照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(资生堂MG C18 4.6×250mm,5μm);以乙腈-四氢呋喃(5:3)为流动相A,以0.6%冰乙酸溶液(用三乙胺调节pH值至6.0)为流动相B;检测波长为220nm。理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于5000。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0〜75 | 12→49 | 88→51 |
75〜76 | 49→12 | 51→88 |
76〜85 | 12 | 88 |
参照物溶液的制备 取盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、脱氢紫堇碱、水合氧化前胡素、延胡索乙素、欧前胡素、延胡索甲素、异欧前胡素对照品,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备 取元胡止痛片,除去包衣,研细,取约10片量,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇15ml,超声处理(功率300W,频率25kHz)30分钟,放冷,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,在5〜80分钟范围内对高于脱氢紫堇碱峰面积千分之五的色谱峰进行积分,即得。
按中药色谱指纹图谱相似度评价系统,供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算,相似度不得低于0.80。
对照指纹图谱
峰1:盐酸黄连碱 峰3:原阿片碱 峰4:盐酸巴马汀 峰6:盐酸小檗碱
峰7(S):脱氢紫堇碱 峰8:花椒毒酚 峰9:白当归素 峰11:水合氧化前胡素
峰12:花椒毒素 峰13:D-四氢药根碱 峰14:佛手柑内酯 峰15:延胡索乙素
峰16:氧化前胡素 峰19:欧前胡素 峰21:延胡索甲素 峰24:异欧前胡素