取本品适量,用水稀释制成每1ml中约含利巴韦林0.5mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取1ml,置100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。取供试品溶液5ml,加入1mol/L的氢氧化钠溶液5ml,静置30min,用5ml 1mol/L的盐酸溶液中和,以产生杂质A的溶液作为系统适用性溶液。照高效液相色谱法(通则0512)试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters Atlantis T3,250×4.6mm,5μm或效能相当的色谱柱);以0.1% 硫酸钠水溶液(取无水硫酸钠1.0g,加水950ml溶解,加2ml 5%磷酸,用5% 磷酸调节pH至2.8,用水稀释至1000ml,即得)为流动相A,以乙腈-流动相A(5:95)为流动相B,以20%乙腈为流动相C,以乙腈为流动相D,按下表进行梯度洗脱;柱温为30℃;检测波长为220nm。精密量取系统适用性溶液、供试品溶液和对照溶液各5μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。系统适用性图谱中杂质A(相对保留时间约为0.78)与利巴韦林的分离度不得小于4.0。供试品溶液色谱图中如有杂质峰,除辅料峰外,杂质A按校正后的峰面积计算(乘以校正因子2.0),不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5%);其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5%);各杂质校正后峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(1.0%)。供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积0. 02倍的峰忽略不计。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) | 流动相C(%) | 流动相D(%) |
0 | 100 | 0 | 0 | 0 |
15 | 100 | 0 | 0 | 0 |
25 | 0 | 100 | 0 | 0 |
35 | 0 | 100 | 0 | 0 |
36 | 0 | 0 | 100 | 0 |
41 | 0 | 0 | 100 | 0 |
41.1 | 0 | 0 | 0 | 100 |
60 | 0 | 0 | 0 | 100 |
60.1 | 0 | 0 | 100 | 0 |
65 | 0 | 0 | 100 | 0 |
66 | 100 | 0 | 0 | 0 |
75 | 100 | 0 | 0 | 0 |