照高效液相色谱法(通则 0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液（pH8.0，取磷酸氢二钠1.50g与磷酸二氢钠（含两个结晶水）0.15g，加水使溶解成1000ml）为流动相A，以甲醇：乙腈：水（45:45:10）为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；0～16.0分钟，检测波长为338nm，17.5分钟（赖氨酸色谱峰结束后），检测波长转换为262nm；柱温为45℃；理论板数按丙氨酸峰计算应不低于20000。

对照品溶液的制备  精密称取天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸、酪氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、鸟氨酸、亮氨酸、赖氨酸、脯氨酸对照品适量，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml各200μg的溶液，即得。

系列标准曲线溶液制备  精密量取上述对照品溶液适量，加0.1mol/L盐酸溶液分别制成每1ml各10、20、50、100、200μg/ml的溶液，即得。

供试品溶液的制备  精密量取本品1ml，置10ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，放置过夜，离心，取上清液，即得。

测定法  分别精密吸取系列标准曲线溶液和供试品溶液各1µL，注入液相色谱仪，采用1%邻苯二甲醛(OPA)溶液与0.5%一氯甲酸芴甲酯溶液(FMOC)计算机模拟柱前衍生化，测定计算氨基酸总量，即得。

本品每1ml含水牛角、板蓝根以13种氨基酸的总量计，应为7.7~18.8mg。

注：0.4mol/L硼酸缓冲液(pH10.2)：取硼酸，配制成0.4mol/L的溶液，用40%氢氧化钠溶液调节pH值至10.2，即得（本液需冷藏）。

1%邻苯二甲醛（OPA）溶液：称取邻苯二甲醛（OPA）80mg，加硼酸缓冲液（pH10.2）7ml，乙腈1ml，巯基丙酸125μl，混匀，即得（本液需冷藏）。

0.5%一氯甲酸芴甲酯（FMOC）溶液：称取一氯甲酸芴甲酯（FMOC）50mg，用乙腈-四氢呋喃（4:6）适量使溶解，并稀释至10ml（本液需冷藏）。

柱前衍生化反应：供试品溶液和系列标准曲线溶液在pH10.2的硼酸缓冲液中首先和OPA反应，再用FMOC进行衍生。

柱前衍生化进样程序（瓶1～4分别为OPA、FMOC、水、硼酸盐缓冲液）：

从瓶3吸取0μl（水，清洗针头）；

从瓶4抽取7μl（硼酸盐缓冲液）；

吸取样品1μl；

从瓶3吸取0μl（水，清洗针头）；

 “在空气中”以500μl /min混合8μl，5次；

从瓶1吸取1μl（OPA）；

从瓶3吸取0μl（水，清洗针头）；

“在空气中”以500μl /min混合9μl，25次；

从瓶2吸取1μl（FMOC）；

从瓶3吸取0μl（水，清洗针头）；

“在空气中”以500μl /min混合10μl，50次；

进样。