清开灵注射液中7种有机酸的含量测定方法

发布时间:2021-01-21

照高效液相色谱法(通则0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(色谱柱Agilent Zorbax SB-C18 250mm×4.6mm,5μm);以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱(出峰完毕后用高比例的乙腈冲洗色谱柱);检测波长为327nm。理论板数按绿原酸计算应不低于20000。

时间(分钟)

流动相A(%)

流动相B(%)

流速(ml/min)

0~20

5→10

95→90

0.8

20~30

10

90

0.8

30~45

10→18

90→82

0.8→0.5

45~55

18→23

82→77

0.5

55~70

23

77

0.5

对照品溶液的制备  取咖啡酸对照品、绿原酸对照品和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸对照品适量,精密称定,分别加含2.5%甲酸的50%甲醇溶液制成每1ml含咖啡酸2μg、含绿原酸和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸各5μg的混合溶液,即得。

供试品溶液的制备  精密量取本品5ml,置10ml量瓶中,加5%甲酸甲醇溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。以绿原酸对照品为参照,以其相应的峰为S1峰,计算新绿原酸、隐绿原酸的相对保留时间;以4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸对照品为参照,以其相应的峰为S2峰,计算3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±5%范围内。相对保留时间及校正因子见下表:

待测成分(峰)

相对保留时间

校正因子

参照峰

新绿原酸

0.64

1.00

S1

绿原酸

1.00

1.00

S1

隐绿原酸

1.07

1.01

S1

3,4-二咖啡酰奎宁酸

0.91

1.48

S2

3,5-二咖啡酰奎宁酸

0.95

0.95

S2

4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸

1.00

1.00

S2

以绿原酸的峰面积为对照,分别乘以校正因子,计算新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸的含量;以4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸的峰面积为对照,分别乘以校正因子,计算3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸的含量。

本品每1ml含金银花、栀子以新绿原酸(C16H18O9)、绿原酸(C16H18O9)、隐绿原酸(C16H18O9)、咖啡酸(C9H8O4)、3,4-二咖啡酰奎宁酸(C25H24O12)、3,5-二咖啡酰奎宁酸(C25H24O12)和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸(C25H24O12)的总量计,应为32 ~130μg。