照高效液相色谱法(中国药典 2015年版四部通则0512)测定,用氰基硅烷键合硅胶为填充剂(Zorbax SB-CN,150×4.6mm,5µm或效能相当的色谱柱);以缓冲液*-乙腈(85∶15)为流动相A,以乙腈为流动相B,按下表进行梯度洗脱;柱温为30°C;检测波长为210nm;进样室温度25°C。
*缓冲液:0.01mol/L磷酸盐溶液(称取磷酸二氢钾1.37g,加水溶解并稀释至1000ml)-0.03mol/L四丁基硫酸氢铵溶液(称取四丁基硫酸氢铵10.19g,加水溶解并稀释至1000ml)(50∶50),用浓氨溶液调节pH值至6.0。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) | 流速(ml/min) |
0 | 100 | 0 | 0.5 |
1.0 | 100 | 0 | 0.5 |
6.0 | 50 | 50 | 0.5 |
6.1 | 48.3 | 51.7 | 1.3 |
9.0 | 20 | 80 | 1.3 |
9.5 | 20 | 80 | 1.3 |
11.0 | 100 | 0 | 1.3 |
13.0 | 100 | 0 | 1.3 |
13.1 | 100 | 0 | 0.5 |
20.0 | 100 | 0 | 0.5 |
对照品溶液的制备 取焦亚硫酸钠约50mg及维生素C 25mg,精密称定,置50 ml量瓶中, 加乙腈-水(15∶85)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液III;精密量取对照品溶液III 5ml,置10ml量瓶中,加乙腈-水(15∶85)稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液II;精密量取对照品溶液III 5ml,置50ml量瓶中,加乙腈-水(15∶85)稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液I。
供试品溶液的制备 长春西汀注射液样品:取本品4瓶,混合均匀,精确量取5ml,置10ml量瓶中,加乙腈-水(15∶85),稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液;
注射用长春西汀样品:取本品4瓶,分别精密加入水2ml,混合均匀,精确量取5ml,置10ml量瓶中,加乙腈-水(15∶85),稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液;
长春西汀氯化钠注射液样品:取本品溶液作为供试品溶液。
测定方法 量取对照溶液Ⅱ 5µl,注入液相色谱仪,出峰顺序依次为维生素C、焦亚硫酸钠,理论塔板数按焦亚硫酸钠峰计算应不低于2000,抗坏血酸峰与焦亚硫酸钠峰的分离度应符合要求,焦亚硫酸钠的拖尾因子应在0.8~2.0。
精密量取对照溶液I、对照溶液II、对照溶液Ⅲ及供试品溶液各5μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图;以对照溶液I、对照溶液II对照溶液III 中焦亚硫酸钠或维生素C的浓度(mg/ml)为横坐标,以其对应的峰面积为纵坐标,进行线性回归;将供试品溶液中焦亚硫酸钠或维生素C的峰面积代入线性方程,计算样品中焦亚硫酸钠或维生素C含量。