UHPLC-MS/MS条件:色谱柱Shim-pack XR-ODS C18柱(2μm,2.0mm×100mm)。流动相:A为5mmmol/L乙酸铵(含0.1%甲酸溶液);B:甲醇乙腈混合溶液(1:1),流速0.3ml/min。梯度洗脱:0min~10min,A:85%→15%;10min~12min,A:25%→25%;12min~12.01min,A:25%→85%,12.01min~14min,A:85%→85%。柱温30℃,进样量:5μL。离子源为ESI+;扫描方式为多反应监测(MRM);电喷雾5500V;离子源温度为550℃。质谱参数见表1。
表1 黄曲霉毒素B1、 B2、 G1、 G2的质谱参数
Q1/Q3 | 定量离子对 | DP(V) | CE(V) |
313.1/241.0 | 313.1/241.0 | 120 | 52 |
313.1/285.1 | 120 | 32 | |
315.0/259.1 | 315.0/259.1 | 60 | 36 |
315.0/287.1 | 60 | 37 | |
329.1/243.1 | 329.1/243.1 | 65 | 34 |
329.1/311.1 | 65 | 43 | |
331.1/313.1 | 331.1/313.1 | 75 | 34 |
331.1/245.1 | 75 | 39 |
对照品溶液的制备:精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液(黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0µg/ml、0.3µg/ml、1.0µg/ml、0.3µg/ml)0.5ml,置10ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,作为贮备溶液。精密量取贮备液1ml,置25ml量瓶中,用70%甲醇稀释至刻度,即得。
供试品溶液的制备:取样品内容物5g,精密称定,加入3g氯化钠,70%甲醇50ml,振摇提取20分钟,离心5min(离心速度3000r/min),精密吸取上清液10ml,用水稀释至50ml,摇匀,离心5min。精密量取上清液20ml,通过免疫亲和柱(流速1-2滴/秒),随后用水20ml洗脱(流速2-3滴/秒),洗脱完成后过空气30秒,洗脱液弃去,再用1.2ml甲醇洗脱(重力洗脱),收集甲醇洗脱液,用水稀释至2ml,摇匀,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液质联用仪,即得。
本品每1000g含黄曲霉毒素B1不得过5µg,含黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的总量不得过10µg。