【检查】  凝集素

兔血红细胞悬浮液  取新鲜兔血18ml，放入盛有2ml 5%柠檬酸三钠溶液的锥形瓶中，小心混匀后于4℃ 冰箱中保存备用( 2 d 内使用) 。取上述5%柠檬酸三钠溶液保存的新鲜血液8ml置于离心管中，离心10 min（2 000 r /min），弃去上清液，再加生理盐水，离心10 min（2000 r/min），反复洗涤3-5次至上清液澄清，弃上清液。取下层红细胞加入PBS溶液配成2%的红细胞混悬液，4℃保存备用。

兔红细胞凝集法凝集素生物活性的检查  在96 孔“V”型血凝板中除第一孔外每孔加入100μl的磷酸缓冲液（PBS），向第一孔、第二孔加入100μl的粗品溶液，混匀；从第二孔吸出100μl，加入第三孔，混匀；以此类推制成2¹、2²、…、2ⁿ倍比稀释液，倒数第二孔吸出的100ul丢弃。以PBS缓冲液，作为空白对照。再向每孔中分别加入100μl 2%红细胞混悬液，混匀，平行5孔检测，置于37℃(±5℃)下反应3 h，观察反应结果。

血凝结果的判断  肉眼观测结果，无凝集时血球沉于圆孔底部，呈一小圆点，凝集时血球相互聚集形成一片网络，血球不下沉。不同凝集程度表示如下：

I（不凝集）：血球全部沉积于圆孔底部，呈边缘清晰的小圆点；

II（少许凝集）：血球大部分沉于圆孔底部，边缘有少许凝集的红细胞，圆点比I要小；

III（半凝集）：红细胞大约有一半沉于圆孔底部，红细胞凝集成片，圆点大约是不凝集时的一半；

IV（大部分凝集）：只有少许红细胞沉于圆孔底部，沉积点边缘模糊不清；

V（全凝集）：红细胞凝集成一片网络或凝集成块状铺于圆孔底部，圆孔底部没有血球沉积点形成。

凝集素极少或接近无时呈现“I、II”程度。凝集结果判定见图1红细胞凝集结果示意图。以“I、II”判断为无凝集反应，“Ⅲ 、Ⅳ、V”判断为有凝集反应。

供试品凝集反应，应呈现IV（大部分凝集）、V（全凝集）现象。

图  红细胞凝集结果示意图