黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮 照高效液相色谱-质谱法（通则0512和通则0431）测定。
色谱、质谱条件与系统适用性试验 Agilent Zorbax Eclipse plus C18色谱柱(3. 0mm×100mm，1. 8μm), 以0.1%甲酸的乙腈溶液为流动相A，0.1%甲酸水溶液为流动相B，按表1中规定的梯度洗脱；流速为0.3mL/min，柱温为30℃，进样量5μl。
表1 流动相梯度洗脱表
时间（分钟） | 流动相A（%） | 流动相B（%） |
0~3 | 15→70 | 55→30 |
3～5 | 70 | 30 |
5～5.5 | 70→15 | 30→15 |
5.5～7 | 15 | 85 |
质谱条件 电喷雾正离子扫描（ESI+），源喷射电压为5500V，雾化气(gas1)为60psi，加热气(gas2)为60psi，帘气为20psi，去溶剂温度为600℃；采用多反应离子监测模式（MRM）采集方式，其余质谱分析参数见表2。
表2质谱参数
待测物 | 母离子/m/z | 子离子/m/z | Dwell time(ms) | Fragmentor/V | CE/V |
黄芪甲苷 | 807.2 | 627.2 | 100 | 150 | 61 |
毛蕊异黄酮 | 285 | 269.8 | 100 | 125 | 26 |
毛蕊异黄酮葡萄糖苷 | 446.9 | 284.8 | 100 | 110 | 35 |
芒柄花素 | 269 | 196.9 | 100 | 145 | 46 |
对照品溶液的制备 分别精密称取黄芪甲苷、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素对照品适量，加甲醇溶解并定容，摇匀，制成每1ml含黄芪甲苷10μg、毛蕊异黄酮1.2μg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.8μg、芒柄花素0.1μg混合对照品溶液。
供试品溶液的制备 精密量取本品0.1ml置100ml量瓶中，用15%乙腈水溶液（含0.1%甲酸）稀释至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5µl，注入液质联用仪，测定，即得。
