【检查】 山银花（1）照高效液相色谱法（《中国药典》2020年版四部通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱：Zafex JX-C18（5μm，250×4.6mm）；以乙腈为流动相A，以0.4%醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，柱温为30℃，流速为每分钟1ml；蒸发光散射检测器，空气流速每分钟3L，漂移管温度105℃。理论板数按灰毡毛忍冬皂苷乙峰峰计算应不低于5000。

表18 流动相梯度表

对照品溶液的制备 取灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml各含灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙0.18mg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取约5g（约相当于金银花饮片0.3g），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率500W，频率53kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，离心（3000转/min）5分钟，精密量取上清液25ml，水浴上浓缩至约1ml，再用50%甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，离心（12000转/min）5分钟，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液2μl、20μl和供试品溶液10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。

拟定限度：本品每1g含山银花以灰毡毛忍冬皂苷乙（C₆₅H₁₀₆O₃₂）和川续断皂苷乙（C₅₃H₈₆O₂₂）的总量计，不得过0.16mg。

备注：必要时可采用如下高效液相色谱-质谱联用方法验证。

（2）照高效液相色谱-质谱法（《中国药典》2020年版四部通则0512和通则0431）测定。

色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Waters ACQUITY UPLC BEH，1.7μm，2.1×100mm）；以乙腈为-0.1%甲酸溶液（30∶70）为流动相，流速为每分钟0.3ml，柱温为30℃；采用三重四级杆串联质谱检测器；电喷雾（ESI）离子源，负离子扫描，多反应监测（MRM），选择灰毡毛忍冬皂苷乙质荷比（m/z）1397.66→1073.89和1397.66→912.09、川续断皂苷乙质荷比（m/z）1073.64→749.73和1073.64→323.10作为检测离子对。

对照品溶液的制备 取灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml各含灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙1μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 精密量取液相色谱项下供试品溶液1ml，置10ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜（0.22μm）滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2μ1，注入液相色谱-质谱联用仪，测定，即得。

结果判定：供试品离子流色谱中，应不得出现与灰毡毛忍冬皂苷乙对照品或川续断皂苷乙对照品保留时间相同的离子流峰。