【含量测定】 桔梗 照高效液相色谱法(通则0512)和质谱法(通则0431)测定。
色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(色谱柱长度100mm,内径2.1mm,粒径1.9μm);以乙腈-0.1%甲酸溶液(29:71)为流动相;流速为每分钟0.3ml;柱温为25℃;采用质谱检测器,电喷雾负离子模式(ESI-),多反应监测(MRM),桔梗皂苷D选择质荷比m/z 1223.6→681.3、1223.6→541.1和1223.6→496.2作为检测离子对。取桔梗皂苷D对照溶液,进样1μl,按上述离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于10:1。
对照品溶液的制备 取桔梗皂苷D对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,作为贮备液。精密量取贮备液适量,配制成浓度为8.4μg/ml、4.2μg/ml、1.05μg/ml、0.042μg/ml、0.021μg/ml的系列溶液,即得。
供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品,研细,取约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇20ml,密塞,称定重量,超声处理(功率500W,频率40kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 精密吸取上述系列对照品溶液各1μl,注入高效液相色谱-质谱仪,测定峰面积,以峰面积(m/z 1223.6→681.3)为纵坐标,进样浓度为横坐标,绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液1μl,注入高效液相色谱-质谱仪,测定峰面积(m/z 1223.6→681.3),从标准曲线上读出供试品中相当于桔梗皂苷D的浓度,计算,即得。
本品每袋含桔梗以桔梗皂苷D(C57H92O28)计,不得少于0.15mg。