照高效液相色谱法（通则0512）测定
色谱条件与系统适用性试验 phenomenex Kinetex 色谱柱（2.1mm×100 mm，2.6μm）；柱温35℃；以甲醇为流动相A，以0.1%甲酸溶液（含2.5mM的乙酸铵）为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱。理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于3000。
表1 梯度洗脱程序
时间（min） | 甲醇（%） | 0.1%甲酸（含2.5mM乙酸铵）（%） |
0~12 | 33 | 67 |
12~25 | 33→45 | 67→55 |
质谱条件 以三重四级杆串联质谱仪检测；离子源为电喷雾（ESI）离子源，使用正离子扫描模式。监测模式为多反应监测（MRM）；离子源温度：350℃，碰撞气：10 L/min；雾化器压力：40 psi；各化合物离子对信息见表2。
表2 各化合物离子对信息
化合物 | 苯甲酰新乌头原碱 | 苯甲酰乌头原碱 | 苯甲酰次乌头原碱 | 新乌头碱 | 次乌头碱 | 乌头碱 |
定量离子对 | 590.3→540.3 | 604.3→554.3 | 574.3→542.3 | 632.3→572.3 | 616.3→556.3 | 646.3→586.3 |
定性离子对 | 590.3→558.3 | 604.3→572.3 | 574.3→510.3 | 632.3→540.3 | 616.3→524.3 | 646.3→554.3 |
对照品溶液的制备 取苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和乌头双酯型生物碱对照提取物适量，精密称定，加50%甲醇溶液（含0.01M盐酸）分别制成每ml含苯甲酰新乌头原碱0.8µg、苯甲酰乌头原碱0.2µg、苯甲酰次乌头原碱0.4µg、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱各0.2µg的混合溶液。
供试品溶液的制备 取本品2粒或2片，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇溶液（含0. 1M盐酸）50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用50％甲醇溶液（含0.1M盐酸）补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1µL，注入液质联用仪，测定，即得。
限度 本品每粒或每片含附子（制）以苯甲酰新乌头原碱（C31H43NO10）、苯甲酰乌头原碱（C32H45NO10）和苯甲酰次乌头原碱（C31H43NO9）总量:计，不得低于0.80μg；含双酯型生物碱总量以新乌头碱（C33H45NO11）、次乌头碱（C33H45NO10）和乌头碱（C34H47NO11）的总量计，不得过1.8μg。
