【鉴别】水牛角
按《中国药典》（2020年版）四部9101分析方法指导原则进行分析方法学验证。对该检测方法进行专属性及耐用性进行考察，
色谱条件：SCIEX 5500+QTRAP液质联用仪（SCIEX公司），色谱柱Acquity BEH C18（2.1×100 mm，1.7μm）柱温35℃，流动相为0.1%甲酸-0.1%甲酸乙腈溶液，流速为0.3mL/min，按下表规定进行梯度洗脱，进样体积5μL。
表1 梯度洗脱程序
时间（min） | 流动相A%-0.1%甲酸乙腈 | 流动相B%-0.1%甲酸 |
0 | 95 | 5 |
3 | 95 | 5 |
8 | 50 | 50 |
8.1 | 10 | 90 |
10 | 10 | 90 |
质谱条件：采用三重四级杆质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），进行多反应监测（MRM），选择m/z 544.8→663.5和m/z544.8→734.4作为水牛角的检测离子对，CE分别为27和30，Curtain Gas：25.0，Collision Gas：9，IonSpray Voltage：5500，Temperature：500，Ion Sourse Gas1：40，Ion Sourse Gas2：40。
对照品：水牛角浓缩粉，批号121627-201001，购自于中国食品药品检定研究院。
试剂：甲酸为色谱纯，乙腈为LC-MS级。
供试品溶液制备：精密称定2.00g，精密加入10ml变性缓冲液（称取573.1g盐酸胍，121.1g Tris，0.734g EDTA-二钠，加水溶解，加盐酸调pH至8.0，加水稀释至1L，摇匀，即得。）和1ml DTT溶液（0.5 mol·L-1），摇匀，置60℃处理12h，取出放冷至室温，离心（12000r·min-1，10min）。精密量取上清液500μL，精密加入100μL IAA溶液（0.55 mol·L-1），避光反应30min，混匀，离心（12000r·min-1，10min）；精密量取上清液100μL，精密加入900μL碳酸氢铵溶液和5 μL牛胰蛋白酶溶液（10mg· mL-1），37℃酶解12h；然后置90℃处理10min，取出放冷至室温，离心（12000r·min-1，10min），取上清液，即得。
对照品溶液制备：精密称取水牛角浓缩粉10mg，按供试品溶液制备方法制得对照品溶液。
水牛角药材及牛角塞溶液制备：取样品粉碎，称取50mg，按供试品溶液制备方法制备相应溶液。
阴性样品溶液：按清热解毒颗粒的处方及制法，制备缺水牛角阴性对照制剂，按供试品溶液制备方法，制得缺水牛角阴性对照溶液。
结果判定
供试品溶液色谱检出与对照品溶液色谱保留时间相同的色谱峰，所选择的2个监测离子对均出现，且所选的检测离子对峰面积比与对照品的监测离子对峰面积比一致（相对比例＞50%，允许±20%偏差；相对比例＞20%～50%，允许±25%偏差；相对比例＞10%～20%，允许±30%偏差；相对比例≤10%，允许±50%偏差；），可判定检出水牛角特征肽段。
