色谱条件:Waters e2695 高效液相色谱仪(2998 PDA检测器),以 Diomonsil Plus C18(4.6mm*250mm, 5μm)为色谱柱,以甲醇(A)-0.4%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1mL/min,柱温35℃,进样量 10μL,检测波长为238nm、280nm。梯度洗脱程序见表1。
表1 指纹图谱色谱梯度程序
时间(min) | 流动相A%-甲醇 | 流动相B%-0.4%甲酸水 |
0 | 22 | 78 |
16 | 22 | 78 |
40 | 36 | 64 |
62 | 56 | 44 |
85 | 80 | 20 |
90 | 80 | 20 |
供试品制备:精密量取本品口服液1mL,置5mL量瓶中,加70%甲醇至刻度,摇匀,即得;或取颗粒剂1袋,研细,取约1g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入70%甲醇10mL,称定重量,超声处理(功率160W,频率50kHz)30分钟,放冷,再用70%甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
图1 清热解毒口服液/颗粒剂(处方一)对照指纹图谱及混合对照图谱
表2 清热解毒口服液/颗粒剂(处方一)对照指纹图谱共有峰归属
峰号 | 相对保留时间 | 色谱峰指认 | 归属 | 峰号 | 相对保留时间 | 色谱峰指认 | 归属 |
1 | 0.10 | 新绿原酸﹡ | 金银花 | 16 | 0.74 | 3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸﹡ | 金银花 |
2 | 0.11 | (R,S)-告伊春﹡ | 板蓝根 | 17 | 0.76 | 连翘酯苷A﹡ | 连翘 |
3 | 0.16 | 绿原酸﹡ | 金银花 | 18 | 0.78 | 未知4 | 黄芩 |
4 | 0.18 | 隐绿原酸﹡ | 金银花 | 19 | 0.90 | 4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸﹡ | 金银花 |
5 | 0.19 | 京尼平龙胆双糖苷﹡ | 栀子 | 20 | 0.94 | 6’-O-香豆酰基京尼平龙胆二糖苷﹡﹡ | 栀子 |
6 | 0.21 | 咖啡酸﹡ | 金银花 | 21 | 0.98 | 连翘苷﹡ | 连翘 |
7 | 0.24 | 未知1(C18H22O11)﹡﹡ | 金银花 | 22 | 1 | 黄芩苷﹡ | 黄芩 |
8 | 0.26 | 龙胆苦苷﹡ | 龙胆 | 23 | 1.07 | 去甲汉黄芩素苷﹡﹡ | 黄芩 |
9 | 0.28 | 栀子苷﹡ | 栀子 | 24 | 1.10 | 未知5 | 黄芩 |
10 | 0.31 | 芒果苷﹡ | 知母、龙胆 | 25 | 1.12 | 千纸层素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷﹡ | 黄芩 |
11 | 0.51 | 连翘酯苷Ⅰ﹡ | 连翘 | 26 | 1.15 | 汉黄芩苷﹡ | 黄芩 |
12 | 0.55 | 未知2 | 金银花 | 27 | 1.24 | 哈巴俄苷﹡ | 玄参 |
13 | 0.59 | 苯甲酸钠﹡ | 防腐剂 | 28 | 1.25 | 黄芩素﹡ | 黄芩 |
14 | 0.66 | 未知3 | 黄芩 | 29 | 1.36 | 汉黄芩素﹡ | 黄芩 |
15 | 0.73 | 3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸﹡ | 金银花 | 30 | 1.41 | 千纸层素A﹡ | 黄芩 |
注:﹡为经对照品验证成分;﹡﹡为液质鉴别及参照文献验证成分
判定依据:以 0.90 作为相似度合格判定限度