【指纹图谱】 照高效液相色谱法(2020年版中国药典通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以Waters ACQUITY UPLC® BEH C18(1.7µm,2.1mm×75mm)为色谱柱;以甲醇为流动相A,0.1%甲酸溶液为流动相B,按表1中的规定进行梯度洗脱;检测波长按表2的规定进行波长转换;柱温为30℃;流速为每分钟0.3ml。理论板数按黄芩苷峰计算应不得低于5000。
表1 流动相梯度洗脱表
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~50 | 10→30 | 90→70 |
50~85 | 30→47 | 70→53 |
85~90 | 47→90 | 53→10 |
表2 检测波长切换表
时间(分钟) | 加测波长(nm) |
0~20 | 240 |
20~90 | 270 |
参照物溶液的制备 取木兰花碱、龙胆苦苷、栀子苷、格兰地新、盐酸黄连碱、表小檗碱、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对照品适量,加甲醇制成每1mL分别含0.1mg的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物,研细,取约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%乙醇25ml,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用50%乙醇补足减失的重量,摇匀,用0.22μm滤膜滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各1μl,注入超高效液相色谱仪,测定,即得。
供试品指纹图谱中应分别呈现与参照物色谱峰保留时间相同的色谱峰,并应呈现15个共有峰,按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度应不得低于0.90。
龙泽熊胆胶囊对照指纹图谱
(15个共有峰,其中峰1:木兰花碱;峰2:龙胆苦苷;峰3:栀子苷;峰6:格兰地新;峰7:盐酸黄连碱;峰8:表小檗碱;峰10:盐酸小檗碱;峰11:盐酸巴马汀;峰12:黄芩苷;峰13:汉黄芩苷;峰14:黄芩素;峰15:汉黄芩素)