【含量测定】 熊胆粉 照高效液相色谱法(中国药典2020年版通则0512)测定。(避光操作)
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以5mmol/L醋酸铵溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;蒸发光散射检测器检测。理论板数按牛磺熊去氧胆酸峰计算应均不低于3500。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~40 | 25 | 75 |
40~50 | 25→29 | 75→71 |
50~80 | 29 | 71 |
80~100 | 29→40 | 71→60 |
对照品溶液的制备 取牛磺熊去氧胆酸对照品和牛磺鹅去氧胆酸钠对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含牛磺熊去氧胆酸0.30mg、牛磺鹅去氧胆酸钠0.25mg的混合溶液,即得。(牛磺鹅去氧胆酸重量=牛磺鹅去氧胆酸钠重量×0.9578)
供试品溶液的制备 取装量差异项下的内容物,研匀,取约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加甲醇25ml,密塞,超声处理(功率280W,频率40kHz)30分钟,放冷,摇匀,滤过,用少量甲醇分次洗涤容器和滤纸,洗液与滤液,蒸干,残渣加10%氢氧化钠溶液25ml使溶解,并分次转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇振摇提取4次,每次25ml,合并正丁醇提取液,用水50ml洗涤,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇使溶解,并分次转移至10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液5μl、15μl,供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,以外标两点法对数方程计算,即得。
本品每粒含熊胆粉,以牛磺熊去氧胆酸(C26H45NO8S)计不得少于0.21mg;以牛磺鹅去氧胆酸(C26H45NO6S)计不得少于0.16mg。