【检查】黄芩提取物 照超高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0521)测定。
色谱条件与系统适用性试验 采用CORTECS T3 C18色谱柱(2.1×100mm,1.6μm),以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸为流动相B,梯度洗脱,流速为0.35ml/min,柱温30℃,检测波长:254nm理论板数按黄芩苷峰计算应不低于10000。
表1 梯度洗脱表
时间min | A(乙腈) | B(0.1%磷酸) |
0 | 5 | 95 |
0~25 | 5→19 | 95→81 |
25~33 | 19→19 | 81→81 |
33~38 | 19→25 | 81→75 |
38~39 | 25→26 | 75→74 |
39~47 | 26→30 | 74→70 |
47~52 | 30→30 | 70→70 |
52~53 | 30→90 | 70→10 |
53~60 | 90→90 | 10→10 |
参照物溶液的制备 取黄芩对照药材0.1g,加水煎煮1.5小时,滤过,滤液浓缩至近干,精密加入70%甲醇溶液25ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,取出,放冷,再称定重量,用70%甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,滤液用0.22μm微孔滤膜滤过,作为对照药材参照物溶液。另取黄芩苷对照品和汉黄芩苷对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含30ug的混合对照品溶液,摇匀,用0.22μm微孔滤膜滤过,作为对照品参照物溶液。
供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品,混匀,研细,取约0.35g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇溶液25ml,密塞,称定重量,超声处理(功率500W,频率50kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,用70%甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,滤液用0.22μm微孔滤膜滤过,即得。
测定法 分别吸取参照物溶液与供试品溶液各1μl,注入超高效液相色谱仪,测定,即得。
1.黄芩苷;2. 千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷;3.汉黄芩苷;4.黄芩素;5.汉黄芩素
图1 对照药材特征图谱