【鉴别】 生半夏 照高效液相色谱法(中国药典2020年版通则0512)和质谱法(中国药典2020年版通则0431)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(100mm*2.1mm*1.8μm),以甲醇为流动相A,0.1%甲酸水溶液为流动相B,按下表1中的规定进行梯度洗脱;流速为0.3ml/min;柱温为35℃。采用质谱检测器,电喷雾正离子模式(ESI+),扫描方式:多反应监测(MRM);雾化气、鞘气、干燥气、碰撞气均为高纯氮气;雾化器压力:45 psi;干燥气流速:6L/min;干燥气温度:350℃;鞘气流速:12L/min;鞘气温度:350℃;喷雾电压:500 v;毛细管电压:3500 v;质谱参数见表2。
表1 流动相梯度洗脱表
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 10 | 90 |
10 | 75 | 25 |
10.1 | 90 | 10 |
12.0 | 90 | 10 |
表2 质谱采集参数(*离子为定量离子)
Precursor ion | Product ion | Fragmentor(v) | CE(v) |
555.3 | 383.0 * | 124 | 18 |
555.3 | 283.7 | 124 | 26 |
对照药材溶液的制备 取半夏对照药材1g,加水适量,煎煮1小时,滤过,滤液浓缩至10ml。精密量取1ml,置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。
供试品溶液的制备 取本品,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取对照药材溶液和供试品溶液与各3μl,注入高效液相色谱-质谱联用仪,测定。
结果判断 以质荷比m/z 555.3→383.0和m/z 555.3→283.7离子对提取的供试品离子流色谱中,应同时呈现与对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。