【特征图谱】 照高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0521)测定
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,甲醇为流动相B,0.1%磷酸溶液为流动相C,按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为340nm。理论板数按葛根素峰计算应不低于5000。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) | 流动相C(%) |
0~12 | 1→5 | 15 | 84→80 |
12~25 | 5→12 | 15 | 80→73 |
25~31 | 12→19 | 15 | 73→66 |
31~45 | 19 | 5 | 66 |
45~65 | 19→85 | 15 | 0 |
参照物溶液的制备 取丹参对照药材0.l5g、葛根对照药材0.15g、制何首乌对照药材0.1g、醋延胡索对照药材0.06g,血竭对照药材0.04g,乳香对照药材0.04g,天然没药对照药材0.04g,照含量测定项下供试品溶液制备方法进行制备,制成参照物溶液。
对照品溶液的制备 取3’-羟基葛根素对照品、葛根素对照品、3’-甲氧基葛根素对照品、葛根芹菜糖苷对照品、大豆苷对照品、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品、迷迭香酸对照品、丹酚酸B对照品适量,精密称定,分别加50%甲醇制成每1ml含3’-羟基葛根素40μg、葛根素90μg、3’-甲氧基葛根素50μg、葛根芹菜糖苷50μg、大豆苷25μg、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷15μg、迷迭香酸10μg和丹酚酸B 45μg的混合对照品溶液。
供试品溶液的制备 取〔含量测定〕项下供试品溶液即可。
测定法 分别精密吸取参照物溶液、对照品溶液和供试品溶液各10µl,注入液相色谱仪,测定,即得。
供试品色谱中应呈现与对照特征图谱相对应的16个主要色谱特征峰,其保留时间应与参照物色谱中16个主要色谱风暴刘时间相对应;其中1、3、4、5、7、9、10、11号色谱峰应与3/-羟基葛根素、葛根素、3/-甲氧基葛根素、葛根芹菜糖苷、大豆苷、2,3,5,4/-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、迷迭香酸、丹酚酸B对照品色谱峰保留时间相对应。
对照特征图谱
(注:16个特征峰,峰1:3’-羟基葛根素;峰3:葛根素;峰4:3’-甲氧基葛根素;峰5:葛根芹菜糖苷;峰7:大豆苷;峰9:2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷;峰10:迷迭香酸;峰11:丹酚酸B)