【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2020年版通则0512)和质谱法(中国药典2020年版通则0431)测定。
色谱、质谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇为流动相A,以0.1%甲酸为流动相B,按表1流动相比例进行梯度洗脱;流速0.2ml/min,柱温:25℃
表1 更年宁LC-MS/MS多成分含量测定流动相比例表
时间(分钟) | 流动相(A%) | 流动相(B%) |
0~5 | 20 | 80 |
5~25 | 20→60 | 80→40 |
采用电喷雾离子源(electron spray ionization,ESI),正负离子扫描,多反应监测(multiple reactionmonitoring,MRM)模式;各成分质谱参数见表2。
表2 各成分质谱参数
化合物 | 保留时间/min | 扫描方式 | 母离子(m/z) | 子离子(m/z) | 碰撞能量(V) |
哈巴苷 | 1.45 | 负离子 | 409 | 201 | 18 |
409 | 363.4* | 10 | |||
红景天苷 | 1.98 | 负离子 | 299.1 | 118.8* | 20 |
299.1 | 179 | 20 | |||
王不留行黄酮苷 | 8.78 | 正离子 | 749.1 | 437 | 40 |
749.1 | 587* | 34 | |||
特女贞苷 | 13.07 | 负离子 | 685.3 | 299 | 22 |
685.3 | 523.3* | 20 | |||
党参炔苷 | 14.56 | 负离子 | 441.2 | 179.1* | 10 |
441.2 | 185.2 | 15 | |||
蟛蜞菊内酯 | 16.78 | 负离子 | 313 | 270 | 28 |
313 | 298* | 24 | |||
哈巴俄苷 | 18.33 | 负离子 | 493.1 | 147 | 19 |
493.1 | 345* | 10 | |||
6-姜辣素 | 20.22 | 正离子 | 317.9 | 217.1 | 14 |
317.9 | 218* | 15 | |||
白术内酯III | 21.6 | 正离子 | 249.1 | 163 | 18 |
249.1 | 231.1* | 10 | |||
白术内酯II | 22.81 | 正离子 | 233.1 | 187.1* | 16 |
233.1 | 213.1 | 23 | |||
白术内酯I | 24.29 | 正离子 | 231.1 | 185.1* | 23 |
231.1 | 213.1 | 18 |
*:定量离子对
混合对照品溶液的制备 精密称取哈巴苷对照品、红景天苷对照品、王不留行黄酮苷对照品、特女贞苷对照品、党参炔苷对照品、蟛蜞菊内酯对照品、哈巴俄苷对照品、6-姜辣素对照品、白术内酯III对照品、白术内酯II 对照品、白术内酯I 对照品适量,加甲醇制成每1ml含哈巴苷75μg、红景天苷80μg、王不留行黄酮苷70μg、特女贞苷390μg、党参炔苷25μg、蟛蜞菊内酯8μg、哈巴俄苷18μg、6-姜辣素76μg、白术内酯III 8μg、白术内酯II 7μg、白术内酯I 8μg的混合对照溶液。
供试品溶液的制备 取本品水蜜丸适量,研碎,取约2.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入80%甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理(功率500W,频率37kHz)60分钟,放冷,再称定重量,用80%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl,注入高效液相色谱-质谱联用仪,测定,即得。
本品含酒女贞子, 2020年12月30日以前生产样品,以特女贞苷(C31H42O17)计,每1g不得少于238.77μg; 2020年12月30日以后生产样品,以红景天苷(C14H20O7)计,每1g不得少于68.22μg;
含党参以党参炔苷(C20H28O8)计,每1g不得少于5.85μg;
含麸炒白术以白术内酯I(C15H18O2)、白术内酯II(C15H20O2)、白术内酯III(C15H20O3)的总量计,每1g不得少于28.49μg;
含玄参以哈巴苷(C15H24O10)和哈巴俄苷(C24H30O11)的总量计,每1g不得少于153.50μg;
含炒王不留行以王不留行黄酮苷(C32H38O19)计,每1g不得少于38.34μg;
含墨旱莲以蟛蜞菊内酯(C16H10O7)计,每1g不得少于13.64μg;
含干姜以6-姜辣素(C17H26O4)计,每1g不得少于51.30μg。