更年宁中多成分含量测定方法

发布时间:2023-03-14

【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2020年版通则0512)和质谱法(中国药典2020年版通则0431)测定。

色谱、质谱条件与系统适用性试验  

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇为流动相A,以0.1%甲酸为流动相B,按表1流动相比例进行梯度洗脱;流速0.2ml/min,柱温:25

表1 更年宁LC-MS/MS多成分含量测定流动相比例表

时间(分钟)

流动相(A%)

流动相(B%)

0~5

20

80

5~25

20→60

80→40

采用电喷雾离子源(electron spray ionization,ESI),正负离子扫描,多反应监测(multiple reactionmonitoring,MRM)模式;各成分质谱参数见表2。

表2 各成分质谱参数

化合物

保留时间/min

扫描方式

母离子(m/z)

子离子(m/z)

碰撞能量(V)

哈巴苷

1.45

负离子

409

201

18

409

363.4*

10

红景天苷

1.98

负离子

299.1

118.8*

20

299.1

179

20

王不留行黄酮苷

8.78

正离子

749.1

437

40

749.1

587*

34

特女贞苷

13.07

负离子

685.3

299

22

685.3

523.3*

20

党参炔苷

14.56

负离子

441.2

179.1*

10

441.2

185.2

15

蟛蜞菊内酯

16.78

负离子

313

270

28

313

298*

24

哈巴俄苷

18.33

负离子

493.1

147

19

493.1

345*

10

6-姜辣素

20.22

正离子

317.9

217.1

14

317.9

218*

15

白术内酯III

21.6

正离子

249.1

163

18

249.1

231.1*

10

白术内酯II

22.81

正离子

233.1

187.1*

16

233.1

213.1

23

白术内酯I

24.29

正离子

231.1

185.1*

23

231.1

213.1

18

*:定量离子对

混合对照品溶液的制备  精密称取哈巴苷对照品、红景天苷对照品、王不留行黄酮苷对照品、特女贞苷对照品、党参炔苷对照品、蟛蜞菊内酯对照品、哈巴俄苷对照品、6-姜辣素对照品、白术内酯III对照品、白术内酯II 对照品、白术内酯I 对照品适量,加甲醇制成每1ml含哈巴苷75μg、红景天苷80μg、王不留行黄酮苷70μg、特女贞苷390μg、党参炔苷25μg、蟛蜞菊内酯8μg、哈巴俄苷18μg、6-姜辣素76μg、白术内酯III 8μg、白术内酯II 7μg、白术内酯I 8μg的混合对照溶液。

供试品溶液的制备  取本品水蜜丸适量,研碎,取约2.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入80%甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理(功率500W,频率37kHz)60分钟,放冷,再称定重量,用80%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl,注入高效液相色谱-质谱联用仪,测定,即得。

本品含酒女贞子, 2020年12月30日以前生产样品,以特女贞苷(C31H42O17)计,每1g不得少于238.77μg; 2020年12月30日以后生产样品,以红景天苷(C14H20O7)计,每1g不得少于68.22μg;

含党参以党参炔苷(C20H28O8)计,每1g不得少于5.85μg

含麸炒白术以白术内酯I(C15H18O2)、白术内酯II(C15H20O2)、白术内酯III(C15H20O3)的总量计,每1g不得少于28.49μg;

含玄参以哈巴苷(C15H24O10)和哈巴俄苷(C24H30O11)的总量计,每1g不得少于153.50μg;

含炒王不留行以王不留行黄酮苷(C32H38O19)计,每1g不得少于38.34μg;

含墨旱莲以蟛蜞菊内酯(C16H10O7)计,每1g不得少于13.64μg;
含干姜以6-姜辣素(C17H26O4)计,每1g不得少于51.30μg。