【检查】藏柴胡 照高效液相色谱法(中国药典2020年版通则0512)和质谱法(中国药典2020年版通则0431)测定。
色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(100mm×2.1mm×1.9μm);以乙腈为流动相A,0.1%甲酸为流动相B,梯度洗脱(0~3分钟,A相25~30%;3~30分钟,A相30~50%;30~31分钟,A相50~90%;31~34分钟,A相90%;34~35分钟,A相90~25%;35~40分钟,A相25%);流速:0.3ml/min;柱温:35℃;进样量:1μl。采用电喷雾离子源,负离子扫描,多反应监测(MRM)模式;质谱扫描参数见下表。
表 质谱扫描参数
化合物 | 母离子(m/z) | 子离子(m/z) |
尼泊尔柴胡皂苷k | 943.5 | 797.5 |
943.5 | 635.4* | |
943.5 | 781.5 |
*为定量离子对
对照品溶液的制备 取尼泊尔柴胡皂苷k对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含270ng的溶液,即得。
供试品溶液的制备 取本品水蜜丸适量,研碎,取约2.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入含5%浓氨试液的甲醇溶液20ml,密塞,称定重量,超声处理(功率500W,频率37kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用5%浓氨试液的甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl,注入高效液相色谱-质谱联用仪,测定,即得。
结果判定 供试品的m/z 943.5→797.5、m/z 943.5→635.4和m/z 943.5→781.5提取离子流色谱图中,若同时出现与对照品色谱保留时间相同的色谱峰,则要求样品中m/z 943.5→635.4提取离子流图中色谱峰面积不得超过对照品m/z 943.5→635.4提取离子流图中的色谱峰面积。