照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇为流动相A,0.5%甲酸为流动相B,按表1梯度洗脱,流速0.6ml/min,检测波长270nm,理论板数按黄芩苷峰计算应不得低于5000,黄芩苷峰、汉黄芩苷峰的分离度均不得低于1.5。
表1 梯度洗脱
时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0-20 | 5%→55% | 95%→45% |
20-40 | 55%→80% | 45%→20% |
对照品溶液制备 取黄芩苷对照品和汉黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成各含60μg的混合对照品溶液,摇匀,用0.22μm微孔滤膜滤过,作为对照品溶液。
供试品溶液制备 取装量差异(重量差异)项下的本品,研细,取约1g(相当于含黄芩生药量0.075g),精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%乙醇溶液25ml,密塞,称定重量,超声处理45min,取出,放冷,再称定重量,用50%乙醇溶液补足减失重量,摇匀,滤过,滤液用0.22μm微孔滤膜滤过,即得。
测定法 分别吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入高效液相色谱仪,测定,即得。
结果判断 供试品溶液色谱应与对照品峰保留时间一致,且汉黄芩苷峰与黄芩苷峰的峰面积比值应不低于0.10。