照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512）和质谱法（中国药典2015年版四部通则0431）测定。
色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱粒径1.7μm）；以乙腈为流动相A，水为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；流速为0.3ml/min。采用质谱检测器，电喷雾负离子模式（ESI-），进行多反应检测（MRM），选择m/z943.5→797.1、m/z943.5→635.2和m/z943.5→781.3为检测离子对。对照品溶液（进样量为5μl）中柴胡皂苷Nepasaikosaponin k的色谱峰（m/z943.5→797.1）信噪比应大于10:1。
表1梯度洗脱程序
时间（分钟） | 流动相A（%） | 流动相B（%） |
0 | 25 | 75 |
0~3 | 25→30 | 75→70 |
3~6 | 30→35 | 70→65 |
6~6.5 | 35→90 | 65→10 |
6.5~9.5 | 90 | 10 |
9.5~10 | 90→25 | 10→75 |
10~15 | 25 | 75 |
对照品溶液的制备 取Nepasaikosaponin k对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1.0μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品，混匀，研细，取约相当于柴胡0.5g的样品，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入含5%浓氨试液的甲醉溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率350W，频率37kHz）30分钟，取出，放冷，再称定重量，用含5%浓氨试液的甲醉溶液补足减失的重量，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，即得。
判定原则 （1）供试品的提取离子流色谱中，未同时检出对照品溶液色谱相应的色谱峰，视为未检出；（2）供试品的提取离子流色谱中，同时检出对照品溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z943.5→797.1的色谱峰面积值不大于对照品溶液中相应的峰面积值者，视为未检出；（3）供试品的提取离子流色谱中，同时检出对照品溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z943.5→797.1的色谱峰面积值大于对照品溶液中相应的峰面积值者，视为检出。
结果判断 供试品的提取离子流色谱中，应不得检出对照品溶液色谱相应的色谱峰。
