【含量测定】 照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验 WatersXSelect HSS T3色谱柱(4.6 mm×150 mm,3.5μm);柱温35℃;流动相A为0.05%甲酸(含5mmol甲酸铵),B为乙腈;按下表4-1进行梯度洗脱;流速0.7 mL·min-1;京尼平龙胆双糖苷和栀子苷的检测波长238nm,黄芩苷、千层纸苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的检测波长275nm。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~10 | 95→90 | 5→10 |
10~20 | 90→84 | 10→16 |
20~40 | 84→70 | 16→30 |
40~50 | 70→50 | 30→50 |
50~55 | 50 | 50 |
55~56 | 50→95 | 50→5 |
56~65 | 95 | 5 |
对照品溶液的制备 取京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、黄芩苷、千层纸苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素适量,精密称定,分别加70%甲醇制成每1ml含京尼平龙胆双糖苷25.69μg、栀子苷193.64μg、黄芩苷76.97μg、千层纸苷15.61μg、汉黄芩苷19.47μg、黄芩苷10.11μg和汉黄芩素6.11μg的混合对照品溶液。
供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物适量,研细,取约0.4g[规格(1)]或0.8g[规格(2)],精密称定,置50ml量瓶中,用70%甲醇适量超声20分钟使溶解,放冷,用70%甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μL,注入液相色谱仪,测定,分别计算栀子苷、黄芩苷、栀子成分总量(京尼平龙胆双糖苷和栀子苷总量)、黄芩成分总量(黄芩苷、千层纸苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素总量),即得。
本品每袋含栀子以含栀子苷(C17H24O10)计,规格(1)不得少于60.0mg, 规格(2)不得少于80.0mg;栀子成分总量以京尼平龙胆双糖苷(C23H34O15)和栀子苷(C17H24O10)的总量计,不得少于85.0mg;含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计,不得少于35.0mg;黄芩成分总量以黄芩苷(C21H18O11)、千层纸苷 (C5H8O6)、汉黄芩苷(C22H20O11)、黄芩素(C15H10O5)和汉黄芩素(C16H12O5)的总量计,不得少于50.0mg。