【指纹图谱】
色谱条件 Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱(2.1mm*100mm,1.8μm),以乙腈为流动相A,0.2%甲酸水溶液为流动相B,按表1中规定的梯度洗脱;流速为0.3mL/min,柱温为35℃,检测波长按表2中进行切换。理论板数按黄芩苷峰计算应不得低于6000。
表1 流动相梯度洗脱表
时间(分钟) | 流速(mL/min) | 乙腈(%) | 0.2%甲酸(%) |
0.3 | 5 | 95 | |
5 | 0.3 | 20 | 80 |
7 | 0.3 | 20 | 80 |
10 | 0.3 | 29 | 71 |
16 | 0.3 | 35 | 65 |
21 | 0.3 | 80 | 20 |
26 | 0.3 | 80 | 20 |
26.1 | 0.3 | 5 | 95 |
35 | 0.3 | 5 | 95 |
表2 检测波长转换表
时间(分钟) | 波长(nm) |
254 | |
5 | 210 |
7 | 230 |
9 | 270 |
10.5 | 230 |
12 | 270 |
20 | 254 |
参照物溶液的制备 取黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成浓度为40μg/mL的溶液。
供试品溶液的制备 取本品水蜜丸或水丸适量,研细,混匀,0.5g,精密称定;或取小蜜丸或重量差异项下的大蜜丸,剪碎,混匀,取lg,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇25mL,称定重量,小蜜丸、大蜜丸浸泡10小时以上,用玻棒研磨使供试品溶散,用数滴甲醇冲洗玻棒于锥形瓶中,超声处理(功率160W,频率50kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,或挥散至原重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各5μL,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图。供试品色谱图应与对照指纹图谱基本一致,出现30个共有峰。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统,供试品指纹图谱与对照指纹图谱相似度计算,相似度应不得低于0.90。
对照指纹图谱 峰S:黄芩苷