【指纹图谱】在含量测定项下供试品图谱中,应检出17个共有峰,以栀子苷峰为参照峰,各峰的相对保留时间分别为0.54、0.83、0.90、1、1.14、1.67、1.86、2.02、2.07、2.21、2.35、2.37、2.58、2.66、2.88、3.15、3.21。
【含量测定】照液相色谱法(中国药典2015年版通则0512)测定。
色谱条件及系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:以乙腈为流动相A,0.1%磷酸为流动相B,按下表梯度洗脱;柱温30℃,流速、检测波长按下表变换;理论板数按栀子苷峰计算应不低于80000。
时间(min) | A(%) | B(%) | 流速 |
0~30 | 5→11 | 95→89 | 0.8 |
30~32 | 11 | 89 | 0.8→1.0 |
32~50 | 11 | 89 | 1.0 |
50~51 | 11→16 | 89→84 | 1.0 |
51~65 | 16 | 84 | 1.0 |
65~97 | 16→30 | 84→70 | 1.0 |
97~120 | 30→50 | 70→50 | 1.0 |
120~130 | 50→70 | 50→30 | 1.0 |
时间(min) | 波长(nm) |
0~37 | 325 |
37~40 | 238 |
40~60 | 275 |
60~65 | 228 |
65~85 | 325 |
85~96 | 274 |
96~105 | 203 |
105~135 | 274 |
135~150 | 325 |
对照品溶液的制备精密称取新绿原酸对照品、绿原酸对照品、隐绿原酸对照品、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸对照品、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸对照品、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸对照品、对羟基苯乙酮对照品、黄芩素对照品、野黄芩苷对照品、汉黄芩素对照品、汉黄芩苷对照品、千层纸素A对照品、栀子苷对照品、千层纸素A苷对照品、苯甲酸对照品,加50%甲醇(黄芩素对照品、野黄芩苷对照品、汉黄芩素对照品、汉黄芩苷对照品、千层纸素A可用甲醇溶解后,再用50%甲醇稀释)制成每1ml含新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、野黄芩苷和汉黄芩素各20ug,3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和千层纸素A各6μg,对羟基苯乙酮和汉黄芩苷各4ug、黄芩素80μg、栀子苷100μg、千层纸素A苷130μg、苯甲酸160μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备精密量取本品3ml,置50ml量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液。取续滤液,即得。
测定法分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。