大黄蛰虫丸中合成色素808猩红检查项补充检验方法

发布时间:2020-04-08

【检查】 808猩红 

(1)高效液相色谱测定方法

照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%甲酸(80:20)为流动相,检测波长为518nm。理论板数不得低于3000。

对照试剂溶液的制备  取808猩红对照试剂适量,精密称定,加甲醇溶解,制成每1mL含5μg的溶液,即得。

供试品溶液的制备  取本品水蜜丸或水丸适量,研细,取约3g,精密称定;或取大蜜丸适量,剪碎,取约6g,精密称定,精密加入硅藻土3g,研匀,取约4.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加三氯甲烷25mL,超声处理30分钟,放冷,滤过,容器及滤渣用三氯甲烷50mL分次洗涤,合并滤液,蒸干,残渣用甲醇适量溶解,并转移至10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

测定法  分别精密吸取对照试剂溶液与供试品溶液各50μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

(2)液相色谱-质谱确证方法

    照高效液相色谱-质谱法(中国药典2015年版四部通则0512和通则0431)试验

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A, 0.1%甲酸溶液(含5mM NH4Ac)为流动相B,梯度洗脱,程序如下:0~3min,70%A;3~3.5min,70%A~95%A;3.5~15min,95%A。流速为1mL/min(分流比为4:1);采用质谱检测器,电喷雾正离子模式(ESI+),进行多反应监测(MRM),检测离子对见下表。

化合物名称

检测离子对(m/z)

碰撞电压(V)

808猩红

368.2→275.05

-17

368.2→219.10

-34

对照品溶液的制备  取808猩红的对照试剂适量,精密称定,加乙腈溶解,制成每1mL含808猩红20ng的溶液,即得。

供试品溶液的制备  取上述(1)项下的供试品溶液1mL,至50mL量瓶中,加乙腈稀释至刻度,滤过,取续滤液,即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入液相色谱-质谱联用仪,测定,即得。