【特征图谱】 照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Phenomenex Gemini C18色谱柱,4.6mm×250mm 5μm);以乙腈为流动相A,以0.2%磷酸溶液为流动相B,按下表程序进行梯度洗脱,流速:0.8ml/min;检测波长为265nm;柱温:25℃。理论板数按盐酸小檗碱计不得低于170 000。
时间(分钟) | 流动相 A(%) | 流动相 B(%) |
0~7 | 16 | 84 |
7~15 | 16→20 | 84→80 |
15~30 | 20→35 | 80→65 |
30~50 | 35→40 | 65→60 |
50~65 | 40 | 60 |
参照物溶液的制备 取木兰花碱、非洲防己碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱对照品适量,加甲醇溶液制成每1ml含0.04mg溶液;再取黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品,分别制成每1ml含20μg,10μg,10μg,2μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备 取本品内容物适量,研细,取约0.4g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加甲醇溶液25ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
供试品特征图谱中应呈现9个特征峰,其中1~5号峰为三颗针特征峰,并应依次与木兰花碱、非洲防己碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱参照物峰保留时间相一致;6~9号峰为黄芩特征峰,并应依次与黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品参照物色谱峰相一致。
对照特征图谱