照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定
色谱条件与系统适应性
色谱柱 Thermol Hypersil BDS C18柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相A 磷酸二氢钾溶液(每100ml加1ml三乙胺)、流动相B 乙腈,梯度洗脱:流动相A 0~4min为85%,4~14min为85%~20%;检测波长 270nm与210nm;流速 1.0ml/L;柱温为40℃;进样量10μl。拉莫三嗪及各杂质之间的分离度应符合要求。
梯度洗脱程序
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0-4 | 85 | 15 |
4-14 | 85→20 | 15→80 |
溶液的配制
对照品溶液:分别取杂质A、B、C、D、E、G及拉莫三嗪对照品各2mg,杂质F 4mg,精密称定,置同一100ml量瓶中,加甲醇5ml振摇使溶解,再加0.1mol/L盐酸溶液适量,振摇,用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,分别精密量取1ml,置同一100ml量瓶中,加甲醇5ml,用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液及系统适用性溶液。
供试品溶液:取样品的细粉适量(约相当于拉莫三嗪200mg),精密称定,置100ml量瓶中,加甲醇5ml振摇使拉莫三嗪溶解,再加0.1mol/L盐酸溶液适量,振摇,用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;
测定法:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,测定,即得。